基于磁性納米粒子的典型農獸藥殘留免疫分析技術.pdf

1、長期以來，農獸藥殘留引起的食品安全問題一直受到國內外的廣泛關注，發(fā)展可靠、快速、靈敏的殘留分析技術已經成為食品安全保障的迫切需求。其中，免疫分析技術是目前農獸藥殘留快速檢測中應用最普遍的技術，也是國內外的研究熱點。然而，現有的免疫檢測技術在靈敏度、類特異性等方面還無法滿足實際檢測需求；天然酶免疫標記物的不穩(wěn)定、容易失活等缺點也限制了相關免疫分析技術的進一步發(fā)展。本文以農產品中典型有機磷農藥和鹽酸克倫特羅（CL）為研究對象，將磁性納米粒子

2、引入農獸藥殘留分析技術，在研究制備 Fe3O4磁性納米粒子的基礎上，首次研究建立了基于Fe3O4磁性納米粒子類酶活性的有機磷農藥和CL免疫分析技術，為提高農藥多殘留免疫分析方法的類特異性和靈敏度，促進磁性納米免疫技術的發(fā)展，提升我國農獸藥殘留監(jiān)控水平提供了科學依據和技術支持。主要研究結果如下：
　　1.采用共沉淀和氨基修飾法,以1:1000的抗體稀釋度為最佳磁珠包被量，制備了功能化Fe3O4納米磁珠。透射電鏡(TEM)掃描及納米磁

3、珠特性研究結果表明，用3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)修飾的Fe3O4磁性納米粒子粒徑為10nm左右，無明顯增厚現象；功能化納米磁珠的半沉降時間大于1.5 h，抗體包被率最高達57％，表現了良好的穩(wěn)定性和包被率。
　　2.四甲基聯苯胺(TMB)顯色反應單因素優(yōu)化試驗結果表明，1 mL底物緩沖液中含有200μL0.6%（w/v）TMB/DMSO溶液和20μL75%的H2O2，在20℃、pH4和6min反應條件下，上述Fe3O4磁

4、性納米粒子的類酶活性最高。
　　3.采用直接競爭法，以 CL為研究對象，對常規(guī)和基于Fe3O4納米磁珠類酶活性的酶聯免疫檢測法（ELISA）進行了研究，結果表明, Fe3O4磁性納米粒子可代替?zhèn)鹘y的辣根過氧化物酶（HRP）用于ELISA檢測，其最低檢測限（LOD）和線性范圍接近常規(guī) ELISA，分別為0.081和0.177~29.3 ng/mL，交叉反應率、添加回收率均符合檢測要求。
　　4.以毒死蜱和喹硫磷為對象，采用間接

5、競爭法（IC-ELISA），研究建立了有機磷農藥多殘留納米磁珠ELISA檢測方法，并對建立的磁珠一抗（MFA）ELISA進行優(yōu)化，確定了甲醇溶劑濃度為5%、pH為7.4、制備免疫磁珠時所用抗體稀釋度為1：1600的最優(yōu)檢測條件。
　　5.對毒死蜱、喹硫磷等15種農藥交叉反應率與回收率研究表明，與傳統ELISA相比，納米磁珠ELISA(mp-ELISA)的靈敏度和類特異性明顯增加，其中MFA-ELISA對14種有機磷農藥的平均交叉反

6、應率為34%，比傳統ELISA提高了127%，而對呋喃丹等氨基甲酸酯類農藥無特異性反應；MFA-ELISA對毒死蜱的回收率為78-107%，喹硫磷77-110%，符合農殘檢測要求。
　　6.采用間接競爭法，對研究建立的CL單殘留傳統ELISA和納米免疫磁珠 ELISA檢測方法進行比較，結果表明，MFA-ELISA具有靈敏度高，特異性強的特點，與傳統 ELISA相比，抑制中濃度（IC50）降低了28%。豬肉樣品中添加回收率研究結果表