人腦型肌酸激酶Lys177位點(diǎn)突變對(duì)去折疊與再折疊的影響.pdf

1、浙江理工大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：我恪守學(xué)術(shù)遂德，崇尚嚴(yán)謹(jǐn)學(xué)風(fēng)。所肇交的學(xué)位論文，是本人桎導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)千『：l：研究工作聯(lián)取得的成果。除文中已鯛確注明和gf用的內(nèi)容外，本論文不包古任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品及成果的內(nèi)容。論文為本人親自撰寫，我對(duì)所寫的內(nèi)容負(fù)責(zé)，并完全意識(shí)到本聲明的法律縮纂由本人承擔(dān)。學(xué)垃論文作者簽名簽字日期：幻f牛年D6月口5翻浙江理工大學(xué)碩士學(xué)位論文人腦型肌酸激酶Lysl77位點(diǎn)突變對(duì)去

2、折疊與再折疊的影響摘要單核苷酸多態(tài)’I生(singlenucleotidepolymorphism，SNP)是最常見的一種可遺傳的變異，廣泛存在于人基因組。人腦型肌酸激酶(Humanbraintypecreatine”^-kinas，HBCK)與腦部的離子轉(zhuǎn)運(yùn)泵相關(guān)，調(diào)節(jié)異常與神經(jīng)退行性疾病直接相關(guān)。選取HBCK的一個(gè)SNP(rs36002620，177位賴氨酸突變成精氨酸)，記作HBCKK177R。對(duì)照野生型HBCK(記作HBCK—W

3、T)，研究突變體對(duì)去折疊和再折疊的影響，包括鹽酸胍誘導(dǎo)變性、巰基和酪氨酸暴露、內(nèi)源熒光的變化和添加Dextran70、PEG2000的復(fù)性。通過實(shí)驗(yàn)得出以下結(jié)論：1隨著鹽酸胍濃度的增加，HBCKK177R和HBCKwT酶活逐漸減低，且兩者對(duì)鹽酸胍耐受性相近。2HBCKK177R的疏水基團(tuán)更容易受到鹽酸胍的影響。3HBCKK177R和HBCKwT在0-03M鹽酸胍誘導(dǎo)下結(jié)構(gòu)更加緊湊；而鹽酸胍濃度大于03M后，隨著胍濃度的增加，結(jié)構(gòu)更加松散

4、。4通過稀釋復(fù)性發(fā)現(xiàn)：Dextran70和PEG2000基本都降低了再折疊的速率及稀釋復(fù)性后的酶活；相同濃度的PEG2000比Dextran70更不利于肌酸激酶的再折疊；100∥L比509／L的擁擠試劑(Dextran70和PEG2000)更加不利于再折疊；稀釋倍數(shù)對(duì)HBCKwT和HBCKK177R酶活的恢復(fù)量和速率存在影響。通過比較HBCK—K177R和HBCKwT去折疊與再折疊過程中生化物理性質(zhì)的差異，為潛在的肌酸激酶SNP誘導(dǎo)疾病