COST顆粒抗氧化性能及其作用機(jī)制研究.pdf

1、衰老（aging）從生物學(xué)來講本身就是一種趨向死亡，不可逆轉(zhuǎn)的過程。機(jī)體隨年齡增加，自身結(jié)構(gòu)和機(jī)能減退，內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定能力與抵抗力下降。自然界一系列不利活動的存在，如環(huán)境污染、輻射污染、社會壓力等，促使機(jī)體產(chǎn)生大量的氧自由基（Reactive oxygen species，ROS），將加速衰老進(jìn)程。自由基理論認(rèn)為，ROS惡性積累損傷細(xì)胞，誘發(fā)一系列退化性疾病，引起個體衰老。而抗氧化的主要功能便是本身直接清除ROS或間接增加抗氧化酶活性起到清

2、除作用，可以一定程度延緩衰老過程。因此，開發(fā)副作用小、療效佳的抗氧化藥物或保健品具有巨大市場潛力。
　　殼寡糖（chito-oligosaccharide，COS）是由2-10個殼聚糖（Chitosan，CTS）單體組成的降解產(chǎn)物，由于其具有易被人體吸收、轉(zhuǎn)化和利用等特點(diǎn)，更易發(fā)揮其生物學(xué)功能。近年來，COS的抗氧化功能方面的研究越來越受到重視，大量的體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，COS具有較為明顯的清除自由基、提高抗氧化酶活力功能

3、。有研究發(fā)現(xiàn)，COS生物活性會隨著分子量降低而增強(qiáng)，基于此背景，本課題選用平均分子量≤1000 Da殼寡糖顆粒（COST）進(jìn)行了抗氧化、抗衰老相關(guān)研究。
　　本論文通過體外抗氧化、清除自由基研究發(fā)現(xiàn)：（1）不同濃度COST均可以有效地清除DPPH自由基，隨著濃度的升高其清除能力同時升高。（2）不同濃度 COST清除·OH能力較強(qiáng)，其清除·OH能力隨著濃度的提高而升高。（3） COST低濃度時清除·O2-能力較弱，COST濃度>0.

4、5mg/mL，清除·O2-強(qiáng)度隨濃度升高而增強(qiáng)。（4）COST濃度越大，其還原力越強(qiáng)，且具有一定的線性關(guān)系。（5）COST絡(luò)合Fe2+的能力隨著濃度的增加而增強(qiáng)。
　　采用腹腔給藥D-gal誘導(dǎo)C57BL/6J小鼠制備衰老模型，考察COST體內(nèi)清除ROS的抗氧化作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，腹腔注射D-半乳糖誘導(dǎo)的衰老模型出現(xiàn)明顯衰老體征，機(jī)體脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛（MDA）顯著增加，多種抗氧化酶活力下降，包括超氧化歧化酶（SOD）、過氧化氫

5、酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px），證明造模成功并且適用于COST抗氧化的體內(nèi)研究。D-半乳糖誘導(dǎo)衰老模型會使小鼠體重增重率明顯下降，COST則可有效地抑制衰老小鼠體重降低。此外，COS可提高血清SOD活力，降低血清MDA水平，提高還原型谷胱甘肽（GSH）產(chǎn)物，但清除蛋白質(zhì)羰基化產(chǎn)物能力較弱。COST還可以降低心、肝、腎三大重要臟器的MDA水平，提高SOD活力及T-AOC，在肝臟中，除了以上抗衰老指標(biāo)外，COST還可以顯著

6、增加CAT，GSH-Px活力，而在其他器官則不明顯。通過病理切片觀察發(fā)現(xiàn)，COST可以提高脾臟和肝臟指數(shù)及改善其病理狀態(tài)，具有一定提高免疫力和保肝護(hù)肝的能力。
　　本課題組前期研究表明，COST在一定程度具有保肝護(hù)肝作用，可能主要通過保護(hù)肝臟起到抗衰老作用，但分子機(jī)制尚未研究。因此，本研究采用FQRT-PCR法和Western-blotting法檢測各組小鼠肝臟內(nèi)沉默信息調(diào)節(jié)因子2相關(guān)酶1
　?。⊿IRT1）、叉頭框蛋白O家