幾種黃酮類化合物清除活性氧及抗氧化能力的評價.pdf

1、由于外界環(huán)境及人體自身新陳代謝，生物體內(nèi)不斷產(chǎn)生活性氧，它們化學性質(zhì)活潑，參與部分生物功能，然而過多的活性氧會損傷細胞，引發(fā)一系列疾病。當體內(nèi)防御活性氧體系失去平衡時，適時從體外補充具有活性的抗氧化劑是十分必要的。因此開發(fā)及評價一系列安全、價廉、高活性的抗氧化劑具有十分重要的意義。
　　 黃酮類化合物廣泛分布于各種植物，迄今為止已從天然產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)了大量的黃酮類化合物，其中大多數(shù)化合物具有重要的生理和藥理作用。大量研究表明，黃酮類

2、化合物的很多藥理作用與其抗氧化活性存在密切的聯(lián)系。因此關于黃酮類化合物的抗氧化活性的研究對其進一步地開發(fā)利用及其藥理活性的研究具有重要的意義。
　　 本文綜述部分以近幾年有關抗氧化劑及其抗氧化能力評價的文獻為基礎，簡要介紹了活性氧(ROS)、黃酮類化合物以及幾種不同的抗氧化能力的測定方法，并對這些方法做了比較。
　　 本文的實驗研究部分以四種黃酮類化合物作為研究對象測定了它們抗氧化活性的大小，并且探討了結(jié)構(gòu)與抗氧化活性之

3、間的構(gòu)效關系，包括以下幾方面內(nèi)容：
　　 (1)過氧化氫是生物體代謝過程中產(chǎn)生最多的活性氧，過量的過氧化氫會進一步反應生成毒性和活性更強的羥自由基，從而對生物體的細胞膜、蛋白質(zhì)以及DNA等造成損害。黃酮類化合物可以有效地清除體內(nèi)過量的過氧化氫，因此，研究黃酮類化合物對于過氧化氫的清除作用是非常有必要的。本文使用H2O2-魯米諾化學發(fā)光體系系統(tǒng)地測定了白楊素、芹菜素、木樨草素和山萘酚對于H2O2的清除能力，并根據(jù)半數(shù)清除濃度Ec5

4、0值對清除能力進行了比較，探討了清除能力與結(jié)構(gòu)的關系。實驗結(jié)果表明，除了芹菜素對化學發(fā)光體系有增敏作用以外，另外三種被測的黃酮類化合物清除過氧化氫的能力的強弱順序為山萘酚＞木樨草素＞白楊素，它們的Ec50值分別為1.2×10-6、4.7×10-6和2.3×10-5mol/L。根據(jù)實驗結(jié)果，結(jié)合一些量子化學的計算結(jié)果，可以證實，在黃酮類化合物的分子結(jié)構(gòu)中，C環(huán)3位的取代羥基活性最強，B環(huán)3’、4’位的取代羥基活性次之。
　　 (2

5、)羥自由基是人體內(nèi)破壞力最強的活性氧，黃酮類化合物作為性能良好的羥自由基清除劑，可以幫助清除體內(nèi)過多的羥自由基，使羥自由基在體內(nèi)的含量維持在正常水平。本文采用Fenton體系作為羥自由基的生成體系，利用對苯二甲酸作為熒光探針對反應體系中產(chǎn)生的羥自由基進行定量。同時，測定了白楊素、芹菜素、木樨草素和山萘酚清除羥自由基的能力，比較了這四種被測的黃酮類物質(zhì)清除能力的大小，研究了其清除能力的構(gòu)效關系。測得的白楊素、芹菜素、木樨草素和山萘酚的Ec

6、50分別為8.4、7.1、6.8和5.0×10-8mol/L。測試結(jié)果表明，黃酮化合物清除羥自由基能力的強弱是其分子中一些關鍵的結(jié)構(gòu)協(xié)同作用的結(jié)果，對清除能力起主要作用的結(jié)構(gòu)為C環(huán)3位的羥基和B環(huán)上的羥基結(jié)構(gòu)。
　　 (3)總抗氧化活性(totalantioxidantactivity,TAA)是物質(zhì)清除不同的自由基的有效和，物質(zhì)在體內(nèi)起作用的正是其總的抗氧化能力，測定抗氧化物質(zhì)的TAA是十分必要的。本文使用DPPH法和ABTS

7、法對于白楊素、芹菜素、木樨草素和山萘酚的有機相和水相中的總抗氧化活性(TAA)進行了測定，通過兩種方法數(shù)據(jù)的相互比較，推測四種黃酮類物質(zhì)抗氧化的構(gòu)效關系以及反應的機理。結(jié)果表明，黃酮類化合物分子中B環(huán)上的酚羥基表現(xiàn)出較強的反應活性，而C環(huán)上3位的羥基的存在也使黃酮類化合物具有比較高的抗氧化活性。
　　 (4)使用熒光法研究了鋱離子與2-羥基對苯二甲酸(2-OHTPA)在堿性條件下的配合作用，發(fā)現(xiàn)2-OHTPA能夠與EDTA和Tb

8、3+形成Tb3+-EDTA-2-OHTPA三元配合物，該配合物(λex=330nm，λem=557nm)的光譜較2-OHTPA本身的熒光發(fā)射紅移了122nm，這樣可以避免某些物質(zhì)光譜的干擾。本實驗根據(jù)此現(xiàn)象建立了測定羥自由基的新方法，并且使用此方法測定了γ-山竹黃酮(γ-MAG)對羥自由基的清除作用。當2-OHTPA的濃度在6×10-8～4×10-6mol/L的范圍內(nèi)時，其熒光強度F與濃度呈現(xiàn)良好的線性關系，線性相關系數(shù)為0.9980，