三種氨基酸添加下酶法修飾酪蛋白水解物及其體外ACE抑制和抗氧化活性.pdf

1、高血壓是引發(fā)心血管疾病如心力衰竭、中風(fēng)、冠心病和心肌梗塞的重要危險因素。高血壓在發(fā)病前是沒有任何征兆的,所以它十分危險。據(jù)統(tǒng)計,全世界每年因高血壓引發(fā)的心腦血管疾病而死亡的人數(shù)超過1200萬,高血壓已經(jīng)成為人類健康的第一殺手,成為全球性的重大公共衛(wèi)生問題。近年來的研究結(jié)果表明,酪蛋白除具有一定的營養(yǎng)功能之外還具有重要的生理功能,是生物活性肽的重要來源。其中食物蛋白源ACE抑制肽安全性高、副作用小、易吸收,已經(jīng)成為活性肽領(lǐng)域研究熱點,這些

2、ACE抑制肽在開發(fā)具有降血壓功能的食品中具有廣闊的應(yīng)用前景。本研究在添加外源性氨基酸的情況下對酪蛋白水解物進行類蛋白反應(yīng)修飾,以期得到高活性的肽。
　　 利用Alcalase2.4L,FG蛋白酶水解酪蛋白,制備生物活性肽。酪蛋白水解物的ACE抑制活性最高值出現(xiàn)的水解時間為6h,其相應(yīng)的水解度為12.4％、IC50值為42.2μg/mL、DPPH自由基清除率為41.8％。酪蛋白水解物的ACE抑制活性和水解度之間有一定的關(guān)系:當(dāng)酪蛋

3、白水解物的水解度較低時,酪蛋白中具有ACE抑制活性的片段未被充分釋放出來,導(dǎo)致酪蛋白水解物ACE抑制活性低;當(dāng)酪蛋白水解物的水解度過高時,酪蛋白ACE抑制肽進一步酶解,從而失去它們的ACE抑制性。
　　 利用中心組合設(shè)計和響應(yīng)面分析法,優(yōu)化類蛋白反應(yīng)條件。固定酪蛋白水解物的濃度為35％(m/m),反應(yīng)時間為6h,以反應(yīng)體系中游離氨基減少量為響應(yīng)值,考察氨基酸添加量、酶添加量、反應(yīng)溫度及3種外源性氨基酸對類蛋白反應(yīng)程度的影響。研究

4、發(fā)現(xiàn):(1)氨基酸添加量、反應(yīng)溫度、氨基酸種類對類蛋白反應(yīng)的影響顯著,而酶添加量對類蛋白反應(yīng)的影響不大。(2)在分別添加亮氨酸、苯丙氨酸、纈氨酸后,同樣研究反應(yīng)條件對酪蛋白水解物進行類蛋白反應(yīng)的影響,發(fā)現(xiàn)所得到研究結(jié)果是相似的。得到在3種外源性氨基酸添加下酪蛋白水解物類蛋白反應(yīng)的最適反應(yīng)條件為:氨基酸添加量0.6mol/mol、酶添加量3KU/g蛋白、反應(yīng)溫度40℃;(3)對類蛋白反應(yīng)影響的最主要因素為氨基酸添加量、反應(yīng)溫度。
　

5、　 分別添加苯丙氨酸、亮氨酸、纈氨酸于酪蛋白水解物進行類蛋白反應(yīng),制備3個酪蛋白水解物的修飾產(chǎn)物,并測定它們的ACE抑制活性、IC50值和抗氧化活性。結(jié)果表明,酪蛋白水解物的ACE抑制活性隨修飾程度的增加而提高,并且都高于未經(jīng)修飾的酪蛋白水解物,其IC50降低至21.0～25.1μg/mL,表明添加外源氨基酸可提高修飾產(chǎn)物的ACE抑制活性,但添加不同種氨基酸的影響不顯著。類蛋白反應(yīng)修飾后,產(chǎn)物的抗氧化活性明顯提高,且遠高于酪蛋白水解物