三種氨基酸添加下酶法修飾酪蛋白水解物及其體外ACE抑制和抗氧化活性.pdf

1、高血壓是引發(fā)心血管疾病如心力衰竭、中風(fēng)、冠心病和心肌梗塞的重要危險(xiǎn)因素。高血壓在發(fā)病前是沒(méi)有任何征兆的,所以它十分危險(xiǎn)。據(jù)統(tǒng)計(jì),全世界每年因高血壓引發(fā)的心腦血管疾病而死亡的人數(shù)超過(guò)1200萬(wàn),高血壓已經(jīng)成為人類健康的第一殺手,成為全球性的重大公共衛(wèi)生問(wèn)題。近年來(lái)的研究結(jié)果表明,酪蛋白除具有一定的營(yíng)養(yǎng)功能之外還具有重要的生理功能,是生物活性肽的重要來(lái)源。其中食物蛋白源ACE抑制肽安全性高、副作用小、易吸收,已經(jīng)成為活性肽領(lǐng)域研究熱點(diǎn),這些

2、ACE抑制肽在開(kāi)發(fā)具有降血壓功能的食品中具有廣闊的應(yīng)用前景。本研究在添加外源性氨基酸的情況下對(duì)酪蛋白水解物進(jìn)行類蛋白反應(yīng)修飾,以期得到高活性的肽。
　　 利用Alcalase2.4L,FG蛋白酶水解酪蛋白,制備生物活性肽。酪蛋白水解物的ACE抑制活性最高值出現(xiàn)的水解時(shí)間為6h,其相應(yīng)的水解度為12.4％、IC50值為42.2μg/mL、DPPH自由基清除率為41.8％。酪蛋白水解物的ACE抑制活性和水解度之間有一定的關(guān)系:當(dāng)酪蛋

3、白水解物的水解度較低時(shí),酪蛋白中具有ACE抑制活性的片段未被充分釋放出來(lái),導(dǎo)致酪蛋白水解物ACE抑制活性低;當(dāng)酪蛋白水解物的水解度過(guò)高時(shí),酪蛋白ACE抑制肽進(jìn)一步酶解,從而失去它們的ACE抑制性。
　　 利用中心組合設(shè)計(jì)和響應(yīng)面分析法,優(yōu)化類蛋白反應(yīng)條件。固定酪蛋白水解物的濃度為35％(m/m),反應(yīng)時(shí)間為6h,以反應(yīng)體系中游離氨基減少量為響應(yīng)值,考察氨基酸添加量、酶添加量、反應(yīng)溫度及3種外源性氨基酸對(duì)類蛋白反應(yīng)程度的影響。研究

4、發(fā)現(xiàn):(1)氨基酸添加量、反應(yīng)溫度、氨基酸種類對(duì)類蛋白反應(yīng)的影響顯著,而酶添加量對(duì)類蛋白反應(yīng)的影響不大。(2)在分別添加亮氨酸、苯丙氨酸、纈氨酸后,同樣研究反應(yīng)條件對(duì)酪蛋白水解物進(jìn)行類蛋白反應(yīng)的影響,發(fā)現(xiàn)所得到研究結(jié)果是相似的。得到在3種外源性氨基酸添加下酪蛋白水解物類蛋白反應(yīng)的最適反應(yīng)條件為:氨基酸添加量0.6mol/mol、酶添加量3KU/g蛋白、反應(yīng)溫度40℃;(3)對(duì)類蛋白反應(yīng)影響的最主要因素為氨基酸添加量、反應(yīng)溫度。
　

5、　 分別添加苯丙氨酸、亮氨酸、纈氨酸于酪蛋白水解物進(jìn)行類蛋白反應(yīng),制備3個(gè)酪蛋白水解物的修飾產(chǎn)物,并測(cè)定它們的ACE抑制活性、IC50值和抗氧化活性。結(jié)果表明,酪蛋白水解物的ACE抑制活性隨修飾程度的增加而提高,并且都高于未經(jīng)修飾的酪蛋白水解物,其IC50降低至21.0～25.1μg/mL,表明添加外源氨基酸可提高修飾產(chǎn)物的ACE抑制活性,但添加不同種氨基酸的影響不顯著。類蛋白反應(yīng)修飾后,產(chǎn)物的抗氧化活性明顯提高,且遠(yuǎn)高于酪蛋白水解物