可控酶解酪朊酸鈉制備小分子肽的研究.pdf

1、該文主要以酪朊酸鈉為原料,利用可控酶解技術、SDS-PAGE電泳、超濾分離技術,研究小分子肽的制備、分子量分布以及分離純化等.在可控酶解工藝優(yōu)化的研究中,主要研究了酶解時間、酶解溫度、加酶量、底物初始濃度、pH值對酶解的影響,研究結果如下:以小分子肽得率高低為判斷標準,確定堿性蛋白酶水解酪朊酸鈉的最佳條件為:溫度為60℃,pH為6.5,酶解時間約為12小時,底物濃度為10﹪,堿性蛋白酶用量為300u/g(以酪朊酸鈉原料計);中性蛋白酶水

2、解酪朊酸鈉的最佳條件為:溫度為45℃,酶解時間為12小時,加酶量為200u/g(以酪朊酸鈉原料計),pH為6.5,底物濃度為10﹪;復合蛋白酶水解酪朊酸鈉的最佳條件為:溫度為50℃,酶解時間為12小時,加酶量為200u/g(以酪朊酸鈉原料計),pH為6.5,底物濃度為10﹪;大酶(堿性蛋白酶和中性蛋白酶)酶解酪朊酸鈉的最佳條件為:溫度為45℃,酶解時間為12小時,加酶量為200u/g(以酪朊酸鈉原料計),pH為6.5,底物濃度為10﹪,

3、堿性蛋白酶和中性蛋白酶比例為1:2,且同時加入.對不同蛋白酶的酪朊酸鈉水解液進行氨基酸測定,結果表明,不同蛋白酶的酪朊酸鈉水解液中游離氨基酸總量由大到小的順序為:中性蛋白酶>雙酶>復合蛋白酶>堿性蛋白酶.不同蛋白酶切割酪蛋白分子鏈的位點也有不同,但主要切割位點集中在以-Ile、Trp、-Lys、-Leu、-Phe、-Tyr等氨基酸連接的肽鍵部位.對水解液進行感官評價得知,中性蛋白酶水解液最苦,經過相關分析,認為苦味肽是引起水解液苦味的主

4、要因素,疏水性氨基酸是次要因素.酶解液超濾分離研究表明,隨著酶解時間的延長,透過率不斷提高,平均透過速率也越來越大,由0.937ml/min增加到1.934ml/min,而截流率是逐漸降低的.相應地,其總蛋白的透過率從8.13﹪上升到36.93﹪,總肽的透過率從20.78﹪上升到62.73﹪.由透過液的SDS-PAGE電泳圖譜看出,透過液中組分的分子量都低于10KDa,證實了10KDa分離膜對酪朊酸鈉水解液中不同分子量組分具有良好的分離