黑曲霉果膠酯酶的分離純化及其固定化技術(shù)的研究.pdf

1、西華大學(xué)碩士學(xué)位論文黑曲霉果膠酯酶的分離純化及其固定化技術(shù)的研究姓名：焦云鵬申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：食品科學(xué)指導(dǎo)教師：王志民20050501本論文對黑曲霉果膠酯酶做以下三個方面的研究：(1)黑曲霉果膠酯酶發(fā)酵動態(tài)學(xué)的研究(2)黑曲霉果膠酯酶分離純化的研究(3)黑曲霉果膠酯酶的固定化以及固定化酶酶學(xué)性質(zhì)的研究。研究結(jié)果如下：(I)分別研究了黑曲酶(AS3324J的固態(tài)發(fā)酵和液態(tài)發(fā)酵效果并對液態(tài)發(fā)酵進行優(yōu)化：通氣量、接種量、培養(yǎng)周期等條件對

2、黑曲霉As3324產(chǎn)生果膠酯酶的影響。研究發(fā)現(xiàn)：以有機氮為氮源的液態(tài)發(fā)酵優(yōu)于無機氮作為氮源的液態(tài)發(fā)酵和固態(tài)發(fā)酵的效果：固態(tài)發(fā)酵中果膠作為誘導(dǎo)物的發(fā)酵效果優(yōu)于未經(jīng)果膠誘導(dǎo)的；相同條件下，固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)周期短。而液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)周期長；液態(tài)發(fā)酵條件進行優(yōu)化發(fā)現(xiàn)；黑曲霉(AS3324)接種量03ml(3103個孢子)，轉(zhuǎn)速90轉(zhuǎn)／分，30℃下發(fā)酵4天時果膠酯酶活力最大為902個單位鷹升培養(yǎng)基。(2)黑曲酶發(fā)酵液經(jīng)硫酸銨分級鹽析、DEAESephad

3、exA50離子交換層析后果膠酯酶得到純化，同時對商品果膠酶進行研究，從中同樣分離純化出果膠酯酶。兩種來源的果膠酯酶電泳檢測均只有一條帶，達電泳純。(3)研究了明膠固定化果膠酯酶的最佳條件并對固定化酶和液體酶的酶學(xué)性質(zhì)進行了比較。研究發(fā)現(xiàn)：明膠固定化果膠酯酶的最佳條件是：明膠15％，戊二醛5％，用酶量015ml，緩沖液pH40。液體酶經(jīng)固定化后酶的性質(zhì)發(fā)生改變，最適溫度是由40℃上升到45℃，最適pH44降到pH40，Kin值由0017％

4、降到00014％；pH穩(wěn)定性、溫度溫度性、操作穩(wěn)定性和貯存穩(wěn)定性增強：pH穩(wěn)定范圍從28～56增加到28～6O，固定化酶在50℃下保溫3h后酶活保留86％。4℃貯存16天后酶活保留9015％，被反復(fù)利用6次后酶活仍保存8099％，半衰期是11，7天。固定化酶和游離酶作用4h后均能將高酯果膠轉(zhuǎn)化為低酯果膠，但隨時間的延長，游離態(tài)果膠酯酶活性逐漸喪失，其催化作用也就逐漸喪失，而固定化酶作用6h后，果膠酯酶仍具有活性，將甲氧基含量降到314％