工程菌酯酶B1的分離純化及固定化研究.pdf

1、將抗性庫蚊的解毒酶基因即酯酶B1與含有強啟動子PpsbA的質(zhì)粒pRL439體外連接后，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5 α，得到工程菌，該工程菌的表達產(chǎn)物酯酶B1能高效降解有機磷、有機氯、氨基甲酸酯、菊酯等四大類農(nóng)藥。本研究將重組質(zhì)粒pRL-B1轉(zhuǎn)入大腸桿菌DH5 α，以5﹪的接種量轉(zhuǎn)接到LB液體培養(yǎng)基(含100μg/mL氨芐青霉素)中，37℃，180rpm震蕩培養(yǎng)13h。5000rpm離心收集菌體，超聲波破碎工程菌，工程菌酯酶B1降解酶經(jīng)40﹪～8

2、0﹪的硫酸銨粗提，DEAE-Sepharose CL-6B離子交換層析、Sephadex G-150凝膠過濾，得到了分離純化，SDS-PAGE鑒定為單一組分。凝膠過濾法測得分子量為56KD，提純倍數(shù)為33.3，收率為17.9﹪，比活力為74.7U/mg。該酶的最佳作用條件是37℃，pH=7.0，該酶作用于α-乙酸萘酯的Km為1.35×10 -3 mmol/L，Vmax為2.7×104U/mL。酶在pH6～9范圍內(nèi)較穩(wěn)定，金屬Mg2+對該