黑曲霉TH-2蔗糖酶的分離純化及部分性質(zhì)與功能基團研究.pdf

1、蔗糖酶(EC3.2.1.26，Sucrase)，又稱轉(zhuǎn)化酶或β-呋喃果糖苷酶，能夠不可逆地催化蔗糖水解，生成葡萄糖和果糖。它廣泛存在于自然界的動物、植物和微生物中，是生物體中一類重要的水解酶類。研究表明，微生物來源的蔗糖酶比動物、植物來源地蔗糖酶性質(zhì)更加穩(wěn)定，在工業(yè)生產(chǎn)中常以酵母、曲霉和細菌作為主要來源。
　　 本文從實驗室保存的黑曲霉菌株中篩選出蔗糖酶高產(chǎn)菌，并以它作為出發(fā)菌株進行發(fā)酵培養(yǎng)，分離純化出蔗糖酶，并對其部分酶學性質(zhì)

2、進行了研究，結(jié)果如下：
　　 從實驗室保存的14株黑曲霉菌株中篩選出一株蔗糖酶高產(chǎn)菌株黑曲霉TH-2。黑曲霉TH-2發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵菌絲體經(jīng)研磨、抽提、透析、DEAE-Sepharose離子交換層析、Superdex-200凝膠過濾層析得蔗糖酶純品，并以SDS-PAGE檢測其純度。純化后的蔗糖酶比活為135.2U/mg，回收率為37.7％，提純倍數(shù)為20.3倍。
　　 測得該酶分子量為129kD，亞基分子量約為63.75k

3、D，為雙亞基酶。該酶最適溫度為65℃，最適pn為4.4，在pH3～5范圍內(nèi)較穩(wěn)定，米氏常數(shù)Kin值為23.1mmol/L。
　　 在實驗的幾種化學試劑中，抗壞血酸的抑制作用最強，EDTA、雙氧水和尿素對酶的活性影響不顯著。在實驗的金屬離子中，Hg+、Ag+對蔗糖酶有很強的抑制作用；Ca2+、Mg2+、K+、Ba2+、Co2+對其活性僅有較弱的抑制作用；Zn2+、Cu2+、Mn2+對蔗糖酶有激活作用。
　　 采用修飾劑在一