海洋曲霉纖維二糖酶的發(fā)酵、純化與性質(zhì)研究.pdf

1、纖維素酶是組合酶，主要包括了內(nèi)切葡聚糖酶，外切葡聚糖酶和纖維二糖酶三類。其中，纖維二糖酶是纖維素酶系中的重要成員，它的功能是將外切葡聚糖酶和內(nèi)切葡聚糖酶水解纖維素產(chǎn)生的纖維二糖降解為葡萄糖，而且該酶所催化的步驟是整個纖維素水解過程中的限速步驟。
　　 本文從浙江東海海域的淤泥中篩選得到一株纖維素酶生產(chǎn)菌Aspergillus sp.，進行了該菌株固體發(fā)酵培養(yǎng)基組成和發(fā)酵條件的優(yōu)化。在水葫蘆和麩皮以1∶1混合為碳源，添加濃度為0.

2、5％的脲為氮源，初始水含量為55％，初始pH為6，培養(yǎng)溫度為34℃的條件下培養(yǎng)到第9天，纖維二糖酶和內(nèi)切葡聚糖酶的活力達到最高，分別為79.78 U和293.95 U。
　　 建立了纖維二糖酶的純化路線，將粗酶液用50％～70％的(NH4)2SO4進行分級沉淀，再用30kDa的膜進行超濾和濃縮，最后用Q Sepharose FF和Q SepharoseHP離子交換層析進行純化，得到了單一組分的纖維二糖酶，總酶活和總蛋白含量分別由

3、原來的1768.37 U和161.04 mg降為187.65 U和1.43 mg，比活力由原來的10.98 U·mg-1提高到131.04 U·mg-1，純化了11.93倍。經(jīng)SDS電泳鑒定為單一的蛋白條帶，相對分子量約為101 kDa。
　　 對純化得到的海洋纖維二糖酶進行酶學性質(zhì)研究發(fā)現(xiàn)，該酶的最適反應溫度為65℃，最適pH為4.5。 NaCl濃度對酶活力有較大影響，最適NaCl濃度為40 g/L，在20～150g/L的高鹽

4、濃度下，酶活力均高于未含NaCl環(huán)境下的酶活。在NaCl濃度為40 g/L的高鹽環(huán)境下，酶活力提高了23％，是典型的耐鹽酶。同時，該酶具有較高的熱穩(wěn)定性，在60℃下保溫100 min，能保持95％以上的剩余酶活。添加NaCl能大幅度提高酶的熱穩(wěn)定性，在含有40 g/L、60g/L、80 g/L的NaCl溶液中，65℃下該酶的半衰期由原來的51 min分別提高到144 min、157 min和203 min;67℃下的半衰期由原來的29