谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶高產(chǎn)菌株的選育及其酶學(xué)性質(zhì)的研究.pdf

1、亨8e!S7‘f害偽裝青大獸碩士學(xué)位論文谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶高產(chǎn)菌株的選育、及其酶學(xué)性質(zhì)的研究研究生：隧墾媚專業(yè)窘“稱“盒晶抖生研究方向：食品生物掛丕所在學(xué)院：盒晶堂院二零零六年五月十日沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶是一種新型的酶制劑，能夠催化體外多種蛋白質(zhì)之間、蛋白質(zhì)和氨基酸之陽J的交聯(lián)反應(yīng)，使蛋白質(zhì)改性，提高蛋白質(zhì)的功能性和營養(yǎng)價值。因此，在食品加工領(lǐng)域里具有多種重要的用途。國外對該酶的研究較早，而且產(chǎn)品已投入市場。在國內(nèi)，利

2、用微生物發(fā)酵法生產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶的歷史較短，主要是搖瓶發(fā)酵條件的摸索與分析，且多為實(shí)驗室小試水平。有關(guān)酶的分離純化等下游技術(shù)及酶學(xué)性質(zhì)等方面的研究報道，多限于對國外資料的綜述。因此對谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶的研究顯得尤為重要。本文主要從以下四個方面進(jìn)行研究：1谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶高產(chǎn)菌株的選育。通過紫外線和He一№激光對其孢子進(jìn)行復(fù)合誘變，以谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶活力為指標(biāo)，篩選獲得高產(chǎn)菌株。2搖瓶發(fā)酵條件的優(yōu)化。通過單因素實(shí)驗和正交實(shí)驗確定谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶發(fā)酵

3、過程中的最佳營養(yǎng)條件和環(huán)境條件。3谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶的分離純化。對發(fā)酵后所產(chǎn)的谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶采用硫酸銨鹽析、透析脫鹽、冷凍濃縮和SephadexG一100凝膠過濾層析方法進(jìn)行純化。4谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶酶學(xué)性質(zhì)的研究。確定該酶的最適反應(yīng)溫度、最適pH，研究該酶的溫度穩(wěn)定性、pH穩(wěn)定性及金屬離子對它的影響。主要研究結(jié)果如下：1以灰輪絲鏈輪絲菌ZC—03為出發(fā)菌株，采用紫外線和He—Ne激光對其孢子進(jìn)行復(fù)合誘變，篩選獲得一株遺傳性狀穩(wěn)定、產(chǎn)酶能力提高

4、57％的突變株zC一60。2以誘變后的菌株zc一60作為研究對象，對它的搖瓶發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化，得到其最佳培養(yǎng)基組成為：可溶性淀粉3009幾，蛋白胨30Og兒，酵母膏209／L。最適環(huán)境條件為：液體種子種齡為48h，接種量為lO％，初始pH值為7O，250mL三角瓶裝液量為40mL，培養(yǎng)溫度為30℃，搖床轉(zhuǎn)速為160r／min，發(fā)酵時間為64h。谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶活力達(dá)134u／111L。3經(jīng)過鹽析、透析脫鹽、冷凍濃縮和SephadexG一1