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文檔簡介
1、目的:建立人骨肉瘤MG63荷瘤裸鼠模型和金黃色葡萄球菌炎癥反應(yīng)小鼠模型;應(yīng)用99Tcm標記血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF125-136)多肽片段,觀察其在人骨肉瘤MG63荷瘤裸鼠模型和炎癥反應(yīng)小鼠模型的體內(nèi)分布及SPECT顯像特征,對比分析99Tcm-VEGF125-136—MAG3在腫瘤與炎癥反應(yīng)兩種模型中的差別,探討99Tcm-VEGF125-136-MAG3早期診斷
2、腫瘤的可行性及特異性。
方法:
1、建立動物模型
1.1、人骨肉瘤MG63荷瘤裸鼠模型
人骨肉瘤細胞MG63用含10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基在37℃,CO2體積分數(shù)5%的培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)傳代。取對數(shù)生長期的MG63細胞,胰蛋白酶消化后用DMEM高糖培養(yǎng)基制成細胞懸液,對細胞計數(shù)并將細胞濃度調(diào)整為5×107/ml,無菌條件下0.2ml/只注射于BALB/c裸鼠的左前肢根部背側(cè)皮
3、下。
1.2、金黃色葡萄球菌炎癥反應(yīng)小鼠模型
選取雌性、質(zhì)量20~25g的昆明小鼠,取生長良好的金黃色葡萄球菌菌落,用滅菌蒸餾水配制成0.5個麥氏單位濃度(1×108cfu/ml)的菌液,按0.2ml/只注射于每只昆明小鼠的左前肢背側(cè)肌肉。
2、99Tcm-VEGF125-136-MAG3在動物模型的體內(nèi)分布實驗
2.1、99Tcm-VEGF125-136-MAG3在人骨肉瘤MG6
4、3荷瘤裸鼠的體內(nèi)分布實驗
選取20只瘤體形態(tài)規(guī)整,直徑為0.8-1cm的人骨肉瘤MG63荷瘤裸鼠,按隨機數(shù)字法將其分為4組,每組5只。每只裸鼠經(jīng)尾靜脈注入0.2ml約18.5MBq(0.5mCi)99Tcm-VEGF125-136-MAG3,分別于注射后0.5h、1h、2h、4h各處死一組荷瘤裸鼠,心臟取血后,取心、肝、脾、腎、小腸、骨骼、肌肉、腫瘤組織,生理鹽水沖洗,濾紙吸干水分,電子天平準確測量各器官組織質(zhì)量,γ計數(shù)器
5、計數(shù)各器官組織的放射性計數(shù),同時測定相同時刻的標準源的放射性計數(shù)。計算各時間點每克組織的百分注射劑量率(percentage activity of injection dose per gram of tissue,%ID/g)。同步測定不同時間點的腫瘤組織(T)與對側(cè)肌肉組織(M)的放射性計數(shù)比值,即腫瘤組織/肌肉組織(target-to-muscle ratios,T/M)比值。
2.299Tcm-VEGF125-1
6、36-MAG3在金黃色葡萄球菌炎癥反應(yīng)小鼠的體內(nèi)分布實驗
選取20只生長狀態(tài)良好,注射部位出現(xiàn)紅、腫、活動障礙的金黃色葡萄球菌炎癥反應(yīng)昆明小鼠,按隨機數(shù)字法將其分為4組,每組5只。用上述方法(荷瘤裸鼠模型體內(nèi)分布實驗)對炎癥反應(yīng)組小鼠進行體內(nèi)分布實驗,并計算各時間點每克組織的百分注射劑量率(percentage activity of injection dose per gram of tissue,%ID/g)。以炎癥
7、反應(yīng)組織作為靶組織(T),同步測定不同時間點的炎癥組織(T)與對側(cè)肌肉組織(M)的放射性計數(shù)比值,即炎癥組織/對側(cè)肌肉組織T/M比值。
3、99Tcm-VEGF125-136-MAG3在動物模型的SPECT顯像實驗
3.1、另取5只入骨肉瘤MG63荷瘤裸鼠,每只裸鼠經(jīng)尾靜脈注射0.2ml約18.5MBq(0.5mCi)的99Tcm-VEGF125-136-MAG3,分別于注射后0.5h、1h、2h、4h行SP
8、ECT靜態(tài)顯像。利用感興趣區(qū)技術(shù)(regionofinterest,ROI)以腫瘤組織對側(cè)肌肉作為非靶組織,計算不同時間點腫瘤組織與對側(cè)肌肉的放射性計數(shù)的比值(T/NT)。
3.2、同樣的方法對炎性反應(yīng)組(5只)昆明小鼠進行SPECT靜態(tài)顯像,并計算不同時間點的T/NT比值。
結(jié)果:
1、動物模型的觀察與鑒定
1.1、人骨肉瘤MG63荷瘤裸鼠模型
腫瘤細胞接種后,裸鼠
9、于實驗動物中心SPF級(specific pathogen free,無特定病原體)環(huán)境下飼養(yǎng)。大約1-2周成瘤,3-4周肉眼觀察腫瘤長至直徑約0.8-1cm。取少許腫瘤組織進行組織病理學(xué)檢驗,證實為骨肉瘤組織。
1.2、金黃色葡萄球菌炎癥反應(yīng)模型
注射48h后,菌液注射部位的肌肉出現(xiàn)紅、腫、活動障礙。取少許注射部位肌肉組織進行組織病理學(xué)檢驗,證實為炎癥反應(yīng)組織。299Tcm-VEGF125-136-MAG3
10、在動物模型的體內(nèi)分布實驗
99Tcm-VEGF125-136-MAG3在人骨肉瘤MG63荷瘤裸鼠模型的腎臟中放射性分布最高,其次是小腸和肝臟,提示標記物主要經(jīng)腎臟排泄,其次為消化道。其它組織中放射性分布較少。腫瘤組織在各時間點均有較高的放射性攝取,1h時攝取最高。
在炎性反應(yīng)小鼠體內(nèi)腎臟放射性分布最高;其次是小腸和肝臟;其它組織中放射性分布較少。炎癥反應(yīng)組織各時間點均無明顯的放射性攝取。
對人骨
11、肉瘤MG63荷瘤裸鼠組與炎性反應(yīng)組各時間點T/M值比較顯示:腫瘤組各時間點T/M值均高于炎性反應(yīng)組,其中注射后1h腫瘤組與炎性反應(yīng)組T/M比值分別為3.04±0.07和1.26±0.37,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=10.70,P<0.05)。
3、99Tcm-VEGF125-136-MAG3在動物模型的SPECT顯像實驗
人骨肉瘤MG63荷瘤裸鼠組,99Tcm-VEGF125-136-MAG3在腫瘤部位可見放射性
12、聚集,0.5h、1h、2h、4h各組中于1h時腫瘤顯像最清晰。注射99Tcm-VEGF125-136-MAG30.5h后腎、肝臟及腸道等組織可見明顯顯影,隨時間延長,腎、肝臟及腸道等組織顯影逐漸變淡。腦、甲狀腺及肌肉未見明顯顯影。
炎性反應(yīng)小鼠組,炎癥反應(yīng)部位各時間點顯影均較淡,無明顯的99Tcm-VEGF125-136-MAG3攝取。注射后0.5h腹腔顯影明顯,隨時間延長顯影逐漸變淡,腦、甲狀腺及肌肉等組織未見明顯放射性
13、攝取。
利用ROI法測得人骨肉瘤MG63荷瘤裸鼠組與炎性反應(yīng)組各時間點T/NT值顯示:腫瘤組各時間點T/NT值均高于炎性反應(yīng)組,其中注射后1h腫瘤組與炎性反應(yīng)組T/NT比值分別為3.10±0.19和1.34±0.55,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=6.73,P<0.05)。
結(jié)論:99Tcm-VEGF125-136-MAG3可被荷瘤裸鼠高表達VEGFR的腫瘤組織攝取,在炎癥反應(yīng)組織攝取不明顯;SPECT顯像示99Tc
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