肝癌中HBV對(duì)HLAⅠ類(lèi)分子表達(dá)影響的初步研究.pdf

1、人類(lèi)白細(xì)胞抗原(HLA)在抗原遞呈及細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)對(duì)病毒感染細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞的識(shí)別過(guò)程中起關(guān)鍵作用。病毒感染細(xì)胞后，通過(guò)抗原遞呈途徑最終和HLA I類(lèi)分子形成病毒抗原肽/HLAI類(lèi)分子復(fù)合物表達(dá)下細(xì)胞表面，進(jìn)而被特異性的CTL識(shí)別并殺傷。為了逃避這種殺傷，有報(bào)道某些病毒可以采取一系列的策略干擾抗原遞呈，調(diào)控HLA I類(lèi)復(fù)合物的表達(dá)，導(dǎo)致病毒逃避機(jī)體的抗感染免疫。乙型肝炎病毒感染為全球重要健康問(wèn)題之一，大約有3億5干萬(wàn)慢性感染

2、人口，每年死于HBV感染的人數(shù)達(dá)1百萬(wàn)。我國(guó)HBV感染人群比例更大，估計(jì)占總?cè)丝诘?0％。HBV感染可出現(xiàn)多種臨床表現(xiàn)，包括急性、慢性、重型肝炎，可發(fā)展為肝硬化、肝癌，最終常因肝衰竭或肝癌而死亡。我國(guó)原發(fā)性肝癌患者HBV感染率高達(dá)90％，HBV感染者發(fā)生肝癌的概率較無(wú)HBV感染者高數(shù)十倍。已有報(bào)道及本實(shí)驗(yàn)室前期研究中發(fā)現(xiàn)肝癌中HLA I類(lèi)分子表達(dá)較癌旁增加，但其機(jī)制及意義需進(jìn)一步研究。 本實(shí)驗(yàn)室對(duì)肝癌中HLA I類(lèi)分子表達(dá)上調(diào)的

3、機(jī)制已在多水平作了研究。本研究著重探討肝癌中乙型盯炎病毒(HBV)對(duì)HLAI類(lèi)分子表達(dá)影響及其可能的機(jī)制。 應(yīng)用 PCR 檢測(cè)肝癌組織和肝癌細(xì)胞系，HBV 感染情況，流式細(xì)胞儀技術(shù)、RT-PCR 檢測(cè)肝癌細(xì)胞系HepG2 和HBV細(xì)胞模型HepG2.2.15(含雙拷貝的HBV全長(zhǎng)DNA)HLA I類(lèi)分子復(fù)合物和轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)；構(gòu)建HBV真核表達(dá)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染肝痛細(xì)胞系，ELISA檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞HBV抗原分泌情況，RT-PCR、West

4、ern Blot、流式細(xì)胞儀分析HLA I類(lèi)分子在轉(zhuǎn)錄水平、蛋白質(zhì)水平及細(xì)胞表面復(fù)合物水平的變化。研究結(jié)果表明： 1、應(yīng)用PCR檢測(cè)及臨床資料顯示肝癌組織標(biāo)本90％以上存在HBV的感染，而在肝癌細(xì)胞系中檢測(cè)不到HBV<,x>基因。選擇肝癌細(xì)胞系HepG2 和HBV細(xì)胞模型HepG2.2.15為研究對(duì)象，應(yīng)用流式細(xì)胞儀和RT-PCR檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞表而HLA I類(lèi)復(fù)合物和HLA I類(lèi)抗原加工遞呈相關(guān)分子表達(dá)均無(wú)變化。 2、構(gòu)

5、建了HBV真核表達(dá)質(zhì)粒含HBV全基因組的pcDNA3.1-BV1.0和含1.2拷貝HBV全基因組的pcDNA3.1-HBV1.2，轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞系BEL7405后，ELISA檢測(cè)HBV抗原的分泌，前者HBsAg為弱陽(yáng)性，HReAg OD值較低，呈低表達(dá)或不表達(dá)；后者HBsAg分泌呈強(qiáng)陽(yáng)性，HBeAg呈弱陽(yáng)性。利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染后BEL7405細(xì)胞表面的HLA I類(lèi)復(fù)合物的表達(dá)，相對(duì)于對(duì)照空載體，兩個(gè)含HBV全基因組的重紕質(zhì)粒均能增加細(xì)

6、胞HLA I類(lèi)復(fù)合物的表達(dá)，而且pcDNA3.1-HBV1.2較pcDNA3.1-HBV1.0增加的更為顯著。RT-PCR和Western Blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后BEL7405細(xì)胞中HLA I類(lèi)分子及加工遞呈相關(guān)分子表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞中TAP I分子增加顯。 3、表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-HBV1.2轉(zhuǎn)染入肝癌細(xì)胞系BEL7405后，上調(diào)細(xì)胞表面HLA I類(lèi)復(fù)合物，MTT檢測(cè)顯示NK92細(xì)胞對(duì)其殺傷活性受到一定程度的抑制。