HLAI類分子在肝癌中表達異常的分子機制研究.pdf

1、腫瘤細胞表達HLAⅠ類分子是激發(fā)腫瘤抗原特異性CTL細胞進行腫瘤免疫治療的關鍵。已有研究發(fā)現(xiàn)腫瘤絀胞中存在不同程度和各種類型的HLA分子表達下調，在一些類型的腫瘤中這種HLAⅠ類分子的下調或丟失甚至可接近100％，是腫瘤細胞逃避宿主免疫監(jiān)視的重要機制。肝癌在我國發(fā)病率高，臨床病程短，病人預后極差。本研究探討肝癌組織標本中HLAⅠ類及相關分子的表達情況以及肝癌細胞株中HLAⅠ類及相關分子表達異常的分子機制，為臨床開展腫瘤免疫治療提供實驗依

2、據(jù)。 首先應用5種HLA相關分子單抗，采用免疫組化的方法檢測肝癌組織標本中HLA I類分子的表達，統(tǒng)計分析各分子表達之間的關聯(lián)性及其與臨床病理分級的相關性：再分別以HLAⅠ類分子表達上調和下調肝癌細胞系為對象，進一步深入研究其異常表達的分子機制。研究結果表明： 1、采用第十三屆國際主要組織相容性會議所制定的標準，以肝癌高發(fā)的江蘇啟東地區(qū)為研究現(xiàn)場，針對大規(guī)模臨床樣本，檢測其HLAⅠ類及相關分子的表達情況。免疫組化染色結果

3、顯示在165例肝癌組織石蠟切片中，除了LMP2分子之外，HLAⅠ類各分子均有不同程度的上調，其中以HLAⅠ類分子A位點上調最明顯(54％)。此外，還發(fā)現(xiàn)肝癌中存在HLAⅠ類各分子表達一致，在多例組織中存在HLAⅠ類各分子的同時上調。提示在肝癌中有可能存在某一種上游分子誘導所有HLAⅠ類相關分子同時表達增加。本實驗室還運用免疫組化，半定量RT-PCR和Western Blot技術檢測30余例肝癌新鮮組織標本HLAⅠ類分子的表達情況也得到同

4、樣的結果，充分肯定了肝癌中存在有與其他腫瘤HLAⅠ類分子表達下調不一致的情況。 2、對8株肝癌細胞系QGY7701、BEL7402、BEL7405、QGY7703、SMMC7721、BEL7404、HepG2、Q05和正常人肝細胞系L-02以及癌旁肝細胞系QSG7701細胞表面HLAⅠ類復合物表達的研究，發(fā)現(xiàn)與免疫組化結果一致，肝癌中存在著HLAⅠ類分子表達上調和下調的細胞系。熒光定量PCR技術檢測所有細胞系中參與HLAⅠ類抗原

5、加工遞呈過程分子的表達，在HLAⅠ類分子表達上調的細胞系中，QGY7701和BEL7402細胞HLA-A重鏈分子表達高于對照細胞BEL7405，而其它分子改變不明顯。在HLAⅠ類分子表達下調的細胞系BEL7404中，HLA重鏈、輕鏈及TAP分子均表達正常，存在蛋白酶體復合物亞單位LMP2表達減少，LMP7表達缺失。在初步了解導致表面HLAⅠ類復合物表達改變因素的基礎上，集中研究具有代表性的細胞系，運用更多的方法來肯定這些因素的存在并深入

6、分析其具體的分子機制。 3、選用相對低表達HLAⅠ類分子的肝癌細胞系BEL7405為對照，以高表達的肝癌細胞系QGY7701和BEL7402為研究對象。研究發(fā)現(xiàn)HLA-A重鏈分子在轉錄水平的增加是引起這兩株肝癌細胞系HLAⅠ類分子表達上調的關鍵因素，其它抗原加工遞呈分子改變不明顯。進一步研究發(fā)現(xiàn)在這兩株肝癌細胞系中，結合ISRE順式作用序列的轉錄因子IRF-1增加是介導HLA-A重鏈表達增加的重要因素，這與IRF-1在QGY77

7、01和BEL7402表達增加有關。同時，在HLA-A重鏈表達增加的肝癌組織中也發(fā)現(xiàn)IRF-1分子的增加，提示這一分子在調節(jié)肝癌HLAⅠ類分子表達中起重要作用。但這一因子活化的信號刺激來源以及與HBV感染的相關性還需要進一步研究。 4、在對一株低表達HLAⅠ類分子的肝癌細胞系BEL7404的研究中發(fā)現(xiàn)LMP2和LMP7的缺陷是導致其HLA Ⅰ類分子表達下調的主要原因，通過過表達外源性LMP2分子能部分恢復表面HLAⅠ類分子的表達。

8、盡管只轉入外源性LMP7分子不能恢復細胞表面HLAⅠ類復合物的表達，但經(jīng)IFN-γ處理后BEL7404/LMP7細胞HLA I類分子表達量高于經(jīng)IFN-γ處理后的：BEL7404/neo和BEL7404/LMP2細胞。這說明LMP7分子與LMP2分子具有協(xié)同作用，LMP分子的改變影響到肝癌細胞表面HLAⅠ類分子的表達。 以上研究結果提示在我國原發(fā)性肝癌中，存在著HLAⅠ類分子的多種表達異常。其中HLAⅠ類分子在腫瘤中的表達上調比

9、率較高，是一種不同于其它腫瘤細胞HLA分子表達情況的新模型。對HLAⅠ類分子表達上調肝癌細胞系的分子機制研究將為今后進一步尋找這一現(xiàn)象的刺激分子，信號傳導途徑以及肝癌臨床標本中HLAⅠ類分子表達上調的機制奠定基礎。此外，肝癌組織中還存在部分HLAⅠ類分子的下調，以LMP2分子改變最明顯(下調率35％)。對一株典型的LMP分子下調引起HLAⅠ類分子表達缺失的肝癌細胞系進行研究，可以了解LMP分子對于HLAⅠ類復合物形成的影響，其結論將為肝