HLAI類(lèi)分子在肝癌中表達(dá)異常的分子機(jī)制研究.pdf

1、腫瘤細(xì)胞表達(dá)HLAⅠ類(lèi)分子是激發(fā)腫瘤抗原特異性CTL細(xì)胞進(jìn)行腫瘤免疫治療的關(guān)鍵。已有研究發(fā)現(xiàn)腫瘤絀胞中存在不同程度和各種類(lèi)型的HLA分子表達(dá)下調(diào)，在一些類(lèi)型的腫瘤中這種HLAⅠ類(lèi)分子的下調(diào)或丟失甚至可接近100％，是腫瘤細(xì)胞逃避宿主免疫監(jiān)視的重要機(jī)制。肝癌在我國(guó)發(fā)病率高，臨床病程短，病人預(yù)后極差。本研究探討肝癌組織標(biāo)本中HLAⅠ類(lèi)及相關(guān)分子的表達(dá)情況以及肝癌細(xì)胞株中HLAⅠ類(lèi)及相關(guān)分子表達(dá)異常的分子機(jī)制，為臨床開(kāi)展腫瘤免疫治療提供實(shí)驗(yàn)依

2、據(jù)。 首先應(yīng)用5種HLA相關(guān)分子單抗，采用免疫組化的方法檢測(cè)肝癌組織標(biāo)本中HLA I類(lèi)分子的表達(dá)，統(tǒng)計(jì)分析各分子表達(dá)之間的關(guān)聯(lián)性及其與臨床病理分級(jí)的相關(guān)性：再分別以HLAⅠ類(lèi)分子表達(dá)上調(diào)和下調(diào)肝癌細(xì)胞系為對(duì)象，進(jìn)一步深入研究其異常表達(dá)的分子機(jī)制。研究結(jié)果表明： 1、采用第十三屆國(guó)際主要組織相容性會(huì)議所制定的標(biāo)準(zhǔn)，以肝癌高發(fā)的江蘇啟東地區(qū)為研究現(xiàn)場(chǎng)，針對(duì)大規(guī)模臨床樣本，檢測(cè)其HLAⅠ類(lèi)及相關(guān)分子的表達(dá)情況。免疫組化染色結(jié)果

3、顯示在165例肝癌組織石蠟切片中，除了LMP2分子之外，HLAⅠ類(lèi)各分子均有不同程度的上調(diào)，其中以HLAⅠ類(lèi)分子A位點(diǎn)上調(diào)最明顯(54％)。此外，還發(fā)現(xiàn)肝癌中存在HLAⅠ類(lèi)各分子表達(dá)一致，在多例組織中存在HLAⅠ類(lèi)各分子的同時(shí)上調(diào)。提示在肝癌中有可能存在某一種上游分子誘導(dǎo)所有HLAⅠ類(lèi)相關(guān)分子同時(shí)表達(dá)增加。本實(shí)驗(yàn)室還運(yùn)用免疫組化，半定量RT-PCR和Western Blot技術(shù)檢測(cè)30余例肝癌新鮮組織標(biāo)本HLAⅠ類(lèi)分子的表達(dá)情況也得到同

4、樣的結(jié)果，充分肯定了肝癌中存在有與其他腫瘤HLAⅠ類(lèi)分子表達(dá)下調(diào)不一致的情況。 2、對(duì)8株肝癌細(xì)胞系QGY7701、BEL7402、BEL7405、QGY7703、SMMC7721、BEL7404、HepG2、Q05和正常人肝細(xì)胞系L-02以及癌旁肝細(xì)胞系QSG7701細(xì)胞表面HLAⅠ類(lèi)復(fù)合物表達(dá)的研究，發(fā)現(xiàn)與免疫組化結(jié)果一致，肝癌中存在著HLAⅠ類(lèi)分子表達(dá)上調(diào)和下調(diào)的細(xì)胞系。熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)所有細(xì)胞系中參與HLAⅠ類(lèi)抗原

5、加工遞呈過(guò)程分子的表達(dá)，在HLAⅠ類(lèi)分子表達(dá)上調(diào)的細(xì)胞系中，QGY7701和BEL7402細(xì)胞HLA-A重鏈分子表達(dá)高于對(duì)照細(xì)胞BEL7405，而其它分子改變不明顯。在HLAⅠ類(lèi)分子表達(dá)下調(diào)的細(xì)胞系BEL7404中，HLA重鏈、輕鏈及TAP分子均表達(dá)正常，存在蛋白酶體復(fù)合物亞單位LMP2表達(dá)減少，LMP7表達(dá)缺失。在初步了解導(dǎo)致表面HLAⅠ類(lèi)復(fù)合物表達(dá)改變因素的基礎(chǔ)上，集中研究具有代表性的細(xì)胞系，運(yùn)用更多的方法來(lái)肯定這些因素的存在并深入

6、分析其具體的分子機(jī)制。 3、選用相對(duì)低表達(dá)HLAⅠ類(lèi)分子的肝癌細(xì)胞系BEL7405為對(duì)照，以高表達(dá)的肝癌細(xì)胞系QGY7701和BEL7402為研究對(duì)象。研究發(fā)現(xiàn)HLA-A重鏈分子在轉(zhuǎn)錄水平的增加是引起這兩株肝癌細(xì)胞系HLAⅠ類(lèi)分子表達(dá)上調(diào)的關(guān)鍵因素，其它抗原加工遞呈分子改變不明顯。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)在這兩株肝癌細(xì)胞系中，結(jié)合ISRE順式作用序列的轉(zhuǎn)錄因子IRF-1增加是介導(dǎo)HLA-A重鏈表達(dá)增加的重要因素，這與IRF-1在QGY77

7、01和BEL7402表達(dá)增加有關(guān)。同時(shí)，在HLA-A重鏈表達(dá)增加的肝癌組織中也發(fā)現(xiàn)IRF-1分子的增加，提示這一分子在調(diào)節(jié)肝癌HLAⅠ類(lèi)分子表達(dá)中起重要作用。但這一因子活化的信號(hào)刺激來(lái)源以及與HBV感染的相關(guān)性還需要進(jìn)一步研究。 4、在對(duì)一株低表達(dá)HLAⅠ類(lèi)分子的肝癌細(xì)胞系BEL7404的研究中發(fā)現(xiàn)LMP2和LMP7的缺陷是導(dǎo)致其HLA Ⅰ類(lèi)分子表達(dá)下調(diào)的主要原因，通過(guò)過(guò)表達(dá)外源性LMP2分子能部分恢復(fù)表面HLAⅠ類(lèi)分子的表達(dá)。

8、盡管只轉(zhuǎn)入外源性LMP7分子不能恢復(fù)細(xì)胞表面HLAⅠ類(lèi)復(fù)合物的表達(dá)，但經(jīng)IFN-γ處理后BEL7404/LMP7細(xì)胞HLA I類(lèi)分子表達(dá)量高于經(jīng)IFN-γ處理后的：BEL7404/neo和BEL7404/LMP2細(xì)胞。這說(shuō)明LMP7分子與LMP2分子具有協(xié)同作用，LMP分子的改變影響到肝癌細(xì)胞表面HLAⅠ類(lèi)分子的表達(dá)。 以上研究結(jié)果提示在我國(guó)原發(fā)性肝癌中，存在著HLAⅠ類(lèi)分子的多種表達(dá)異常。其中HLAⅠ類(lèi)分子在腫瘤中的表達(dá)上調(diào)比

9、率較高，是一種不同于其它腫瘤細(xì)胞HLA分子表達(dá)情況的新模型。對(duì)HLAⅠ類(lèi)分子表達(dá)上調(diào)肝癌細(xì)胞系的分子機(jī)制研究將為今后進(jìn)一步尋找這一現(xiàn)象的刺激分子，信號(hào)傳導(dǎo)途徑以及肝癌臨床標(biāo)本中HLAⅠ類(lèi)分子表達(dá)上調(diào)的機(jī)制奠定基礎(chǔ)。此外，肝癌組織中還存在部分HLAⅠ類(lèi)分子的下調(diào)，以LMP2分子改變最明顯(下調(diào)率35％)。對(duì)一株典型的LMP分子下調(diào)引起HLAⅠ類(lèi)分子表達(dá)缺失的肝癌細(xì)胞系進(jìn)行研究，可以了解LMP分子對(duì)于HLAⅠ類(lèi)復(fù)合物形成的影響，其結(jié)論將為肝