人肝癌細(xì)胞AFP作為信號分子調(diào)控FN14表達(dá)的分子機(jī)制.pdf

1、背景及目的:AFP作為一個(gè)腫瘤相關(guān)的胎兒蛋白,長期以來被作為檢測胎兒缺陷或腫瘤發(fā)生的一個(gè)重要血清標(biāo)志物。但近幾年來,認(rèn)為胞漿當(dāng)中的AFP可以作為一個(gè)生長調(diào)節(jié)因子,調(diào)節(jié)肝癌細(xì)胞的生長,已經(jīng)得到越來越多的證實(shí)。不過關(guān)于AFP調(diào)控細(xì)胞增殖的具體機(jī)制,目前并不清楚,而其臨床的意義,也需要進(jìn)一步的深入的研究。
　　方法:肝癌病人的組織標(biāo)本通過免疫組化、Western blotting、蛋白質(zhì)免疫共沉淀(CoIP),以及染色質(zhì)免疫共沉淀(Ch

2、IP)等實(shí)驗(yàn)方法,證實(shí)AFP通過參與RAR信號通路而導(dǎo)致的細(xì)胞癌變作用。通過熒光實(shí)時(shí)定量PCR(Real-Time PCR)、Western blotting、免疫熒光染色、CoIP、GST pull-down、siRNA、gene transfection、以及ChIP等多種實(shí)驗(yàn)方法,在4種細(xì)胞系中進(jìn)一步驗(yàn)證AFP通過與RAR相互作用,影響RA-RAR信號通路,導(dǎo)致FN14基因表達(dá)發(fā)生改變,從而發(fā)揮其生長調(diào)節(jié)因子的作用。
　　結(jié)

3、果:組織標(biāo)本中檢測到,胞漿當(dāng)中的AFP可以與RAR相互作用,RAR結(jié)合在FN14基因的上游轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)。在四種AFP表達(dá)水平不同的肝細(xì)胞系中,AFP可以與RAR相互結(jié)合,阻止RAR入核調(diào)控FN14的表達(dá)。在AFP陽性表達(dá)的肝癌細(xì)胞系HepG2和Bel7402細(xì)胞中,采用小RNA干擾AFP的表達(dá),結(jié)果顯示,AFP干擾后,RAR入核結(jié)合在FN14基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)的能力增強(qiáng)。同時(shí)FN14基因的mRNA和蛋白質(zhì)水平也都有相應(yīng)程度的提高,細(xì)胞凋亡增加