Nucleophosmin-B23在肝癌細(xì)胞生長抑制中的分子調(diào)控研究.pdf

1、B23(Nucleopllosmin，NPM，numatrin，N038)是一種多功能的核仁磷酸化蛋白，在細(xì)胞生長和增殖中發(fā)揮重要的作用。以往研究表明它與腫瘤發(fā)生發(fā)展有關(guān)，但它參與腫瘤細(xì)胞生長抑制的分子調(diào)控機(jī)制尚未明了。本研究采用抗癌藥物抑制腫瘤細(xì)胞生長的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，探討B(tài)23在肝癌細(xì)胞生長抑制中的分子調(diào)控機(jī)制。 材料和方法： 用低濃度(0.05 mg/L)的放線菌素D處理HepG2細(xì)胞，，擬用流式細(xì)胞儀 (Flow Cy

2、tometry)、免疫熒光(immunofhlorescence)、免疫印跡(western Blot)、免疫沉淀(immunoprecipitate)及雙向電泳(two-dimetlsional electrophoresis)等技術(shù)，檢測HepG2細(xì)胞周期、B23蛋白表達(dá)水平及其定位、B23的等電點(diǎn)及磷酸化狀態(tài)變化；應(yīng)用免疫熒光和免疫共沉淀探討B(tài)23與P53在藥物處理前后之間的相互關(guān)系。 結(jié)果： 細(xì)胞生長曲線顯示放線

3、菌素D引起肝癌細(xì)胞株不可逆性生長抑制，流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示：細(xì)胞周期阻滯在S/G2期；免疫熒光及免疫印跡結(jié)果顯示：B23在放線菌素D作用下蛋白表達(dá)量沒有變化但發(fā)生可逆的定位改變；雙向電泳及磷酸化狀態(tài)檢測顯示：B23在加藥和撤藥處理后，沒有等電點(diǎn)和磷酸化狀態(tài)改變；免疫印跡結(jié)果顯示：放線菌素D抑制肝癌細(xì)胞生長的狀態(tài)下，p53及p21表達(dá)量顯著增加，免疫沉淀結(jié)果顯示藥物作用后B23與P53有相互結(jié)合。 結(jié)論： 抗癌藥物放線菌