肝癌轉移相關microRNA的鑒定及其分子機制研究.pdf

1、MicroRNAs(miRNAs)是一類約22個堿基的小分子非編碼RNA，它廣泛存在于各種真核生物中，通常在轉錄后水平負調控基因的表達。在肝癌中，miRNAs在組織中表達經常失調，一些特定的miRNAs與肝癌的轉移、復發(fā)和預后等臨床病理特征相關。
　　為了研究miRNAs對肝癌細胞運動以及轉移的作用，本文利用活細胞工作站觀察下的創(chuàng)傷修復實驗篩選人類miRNAs庫并通過transwell實驗進行驗證，通過篩選，我們發(fā)現了11個對肝癌

2、細胞SK-Hep-1遷移有調控作用的miRNAs分子:miR-1247, miR-1244, miR-146b-3p, miR-1471, miR-188-3p, miR-661, miR-891a,miR-891b，miR-767-5p，miR-525-3p和miR-134。進一步的研究發(fā)現miR-134在肝癌中表達下調且其表達水平與淋巴結侵襲和血管侵犯存在負相關。與此同時，過表達miR-134能抑制肝癌細胞體外和體內的侵襲與轉移;抑

3、制內源性的miR-134可以促進肝癌細胞的遷移和侵襲能力。通過生物信息學及基因芯片技術的方法，結合熒光素酶實驗，我們確定了Integrin Beta1(ITGB1)是miR-134的一個直接靶基因，過表達ITGB1可以顯著促進肝癌細胞的遷移與侵襲，且ITGB1可以回復miR-134對肝癌細胞遷移和侵襲的抑制作用。
　　同時，我們通過TCGA數據庫檢測了miR-134以及ITGB1在不同腫瘤中的表達情況。結果顯示，在肝細胞肝癌，透明

4、細胞性腎細胞癌以及甲狀腺癌樣本中，miR-134表達下調，而ITGB1表達上調。在乳頭狀腎細胞癌中，miR-134表達下調，ITGB1的mRNA表達水平無變化。而在頭頸部鱗狀細胞癌中，ITGB1表達上調，miR-134表達水平無明顯變化。同時在頭頸部鱗狀細胞癌中，ITGB1的高表達與其總生存期負相關。
　　通過對細胞形態(tài)變化的觀察，我們發(fā)現miR-134能夠顯著抑制細胞應力纖維的形成，并降低肝癌細胞與基質的粘附能力。Western

5、 Blot實驗表明miR-134的抑制作用與其降低ITGB1下游FAK的磷酸化水平以及RhoA的激活有關，ITGB1基因的過表達可以回復miR-134引起的FAK磷酸化水平下調以及RhoA的活性降低，這些結果表明miR-134能夠抑制ITGB1的信號通路的激活，導致肝癌細胞遷移和侵襲能力的下降。
　　綜上所述，我們通過篩選發(fā)現miR-134能夠抑制肝癌細胞的遷移、侵襲與轉移，ITGB1是受到miR-134直接調控的功能性靶基因。通