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文檔簡介
1、目的:探討新型固體支撐材料改性聚二甲基硅氧烷(Integrated Poly(dimethysiloxane),iPDMS)多肽微陣列和蛋白微陣列技術(shù)應(yīng)用于非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)診療的研究。
方法:第一部分對p53和EGFR胞外段的序列進行疊瓦式切割,構(gòu)建高內(nèi)涵精細多肽庫,建立iPDMS多肽微陣列檢測方案;對150例NSCLC患者和96例健康對照者進行血清p53和EGF
2、R多肽自身抗體的大規(guī)模篩選;應(yīng)用傳統(tǒng)生物信息學手段進行分析研究,確定血清p53和EGFR自身抗體所識別的線性抗原表位位點,探討其潛在的研究價值。
第二部分采用iPDMS蛋白微陣列法定量檢測50例NSCLC患者、50例健康對照者血清IL-6、IL-8、MCP-1、GM-CSF的水平,結(jié)合NSCLC患者不同臨床病理參數(shù)進行分析。
結(jié)果:
第一部分 p53和EGFR多肽的自身抗體既存在于NSCLC患者血清中,也存
3、在于健康對照組的血清中,微陣列芯片表達差異顯著分析(Significance analysis of microarrays,SAM)顯示在NSCLC組和健康對照組血清中存在針對4條p53多肽和2條EGFR多肽的差異表達的自身抗體,這6條多肽的自身抗體在NSCLC患者血清的響應(yīng)明顯高于健康對照組(P<0.05),對這6條具有潛在診斷價值的多肽進行受試者工作特征曲線(Receiver operator characteristic cur
4、ve,ROC)分析發(fā)現(xiàn)多指標聯(lián)合的診斷模型具有更高的診斷效率,由此得到了一個由 p53-02,p53-04,p53-05和EGFR-48構(gòu)成的多指標聯(lián)合診斷模型,該組合模型在特異度為90%時能達到36.7%的靈敏度。線性抗原位點分析發(fā)現(xiàn),血清p53自身抗體的主要識別氨基端(N端)和羧基端(C端)的線性表位,而非中央熱點突變區(qū),而血清EGFR自身抗體識別的高頻位點集中分布在EGFR胞外段L2和S2結(jié)構(gòu)域。
第二部分與健康對照組相
5、比,NSCLC患者血清IL-6、IL-8、GM-CSF水平顯著升高(P<0.01),MCP-1水平升高(P<0.05),差異有統(tǒng)計學意義;與I+II期患者相比,III+IV期患者血清IL-6水平顯著升高(P<0.01),血清MCP-1水平降低(P<0.05),血清GM-CSF水平顯著降低(P<0.01),差異有統(tǒng)計學意義,血清IL-8水平的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者相比,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者血清 IL-6水平升
6、高(P<0.05),差異有統(tǒng)計學意義,血清 IL-8、MCP-1、GM-CSF水平的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);與肺鱗癌患者相比,肺腺癌患者血清IL-8水平升高(P<0.05),差異有統(tǒng)計學意義,血清IL-6、MCP-1、GM-CSF水平的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
結(jié)論:
1. NSCLC組和健康對照組之間存在差異性表達的p53和EGFR多肽自身抗體,可通過iPDMS多肽微陣列技術(shù)加以檢測?;趐53
7、和EGFR多肽庫的NSCLC診斷模型展示出了一定的臨床應(yīng)用前景。iPDMS多肽微陣列技術(shù)為p53和EGFR線性表位的精細定位研究提供了強有力的工具。
2.血清IL-6、IL-8、MCP-1、GM-CSF水平的改變與NSCLC的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),其血清學定量檢測不僅有助于了解 NSCLC患者的免疫功能狀態(tài),而且對NSCLC分期、分型具有一定參考價值。
3. iPDMS微陣列技術(shù)小型化、高通量、多指標、低成本的特點為免
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