分泌型蛋白質(zhì)NBL1在體-肺分流性肺動脈高壓中的作用.pdf

1、第一部分:新型單側(cè)高動力性肺動脈高壓模型的建立
　　 目的:現(xiàn)有大鼠分流模型僅能導致肺血管產(chǎn)生Ⅰ級病變，而先天性心臟畸形患者肺組織內(nèi)典型的肺血管重構(gòu)改變至今尚未在大鼠分流模型中再現(xiàn)。本研究通過分期手術(shù)的方法，建立了一種新型單側(cè)肺動脈高壓大鼠模型，以誘導出更為嚴重的肺血管病變。
　　 方法:經(jīng)右側(cè)肋間如胸腔，結(jié)扎右肺動脈，一周后，建立頸部分流。術(shù)后即刻，8周，12周通過右心導管評估此模型對肺血流動力學的即刻和長期作用。肺組

2、織行HE染色和Weigert's染色來評估肺血管系統(tǒng)形態(tài)學改變情況。同時做了右室肥厚指數(shù)計算和血氣分析。
　　 結(jié)果:頸部分流完成瞬間肺循環(huán)即成循環(huán)高壓狀態(tài)，且隨著病程的進展，逐步發(fā)展至臨界態(tài)。肺血管病理學顯示術(shù)后8周出現(xiàn)可逆病變（Ⅰ-Ⅱ級肺血管病變:中膜肌化，內(nèi)膜增生），術(shù)后12周出現(xiàn)不可逆病變（Ⅲ級肺血管病變:內(nèi)膜纖維化，血管腔閉塞）。同時伴有顯著的右心室肥厚和氧分壓的降低。
　　 結(jié)論:此分流模型成功誘導了肺循環(huán)的

3、高壓狀態(tài)，在相對較短的時間內(nèi)再現(xiàn)了肺血管病變由可逆狀態(tài)向不可逆狀態(tài)的典型轉(zhuǎn)變過程。因此，本研究可為分流性肺動脈高壓潛在機制的研究提供一個死亡率低，可重復強的模型選擇。
　　 第二部分:分泌型蛋白質(zhì)NBL1在體肺分流性肺動脈高壓中的作用
　　 背景:正常情況下主要表達于肺組織，而在體肺分流性肺動脈高壓時發(fā)生特征性改變的蛋白質(zhì)將是先天性心臟病肺動脈高壓研究的新靶點。因此，本研究旨在發(fā)現(xiàn)在先天性心臟病性肺動脈高壓發(fā)生發(fā)展過程中

4、發(fā)生顯著改變的分泌型蛋白質(zhì)。
　　 方法:對5例先天性心臟并合并重度肺動脈高壓的病人和5例先天性心臟病且肺動脈壓力正常的病人外周血進行抗體芯片的測試。篩選出變化顯著的分泌型蛋白質(zhì)，選擇分泌型蛋白質(zhì)NBL1作為進一步研究的靶點蛋白。Elisa的方法驗證分泌型蛋白質(zhì)NBL1在大樣本的臨床病例中的變化趨勢及分泌型蛋白質(zhì)NBL1的血漿濃度和肺血流動力學的相關(guān)性;應(yīng)用RT-PCR，Western-blot及組織化學的方法在我們新近構(gòu)建的大

5、鼠體肺分流模型中進一步驗證，以明確分泌型蛋白質(zhì)NBL1在肺組織中的分布，表達情況及在肺動脈高壓性肺組織中的變化;在肺動脈內(nèi)皮細胞和肺動脈平滑肌細胞中驗證NBL1的來源及重組NBL1蛋白對肺動脈內(nèi)皮細胞和肺動脈平滑肌細胞增殖的影響;最后在體肺分流模型持續(xù)補充重組蛋白NBL1。
　　 結(jié)果:抗體蛋白芯片結(jié)果發(fā)現(xiàn)一些分泌型蛋白質(zhì)在先天性心臟病合并肺動脈高壓的病人和先天性心臟病無肺動脈高壓的病人間有顯著的統(tǒng)計學差異。我們選擇NBL1進行

6、下一步驗證。RT-PCR分析發(fā)現(xiàn)NBL1主要特異性的表達在正常肺組織且其mRNA水平在體肺分流大鼠模型中呈時間依賴性的下降;Western-blot分析顯示NBL1在正常肺組織中高表達且在體肺分流性肺組織中亦呈時間依賴性的表達下降;組織化學顯示NBL1在正常肺組織中高表達，而在體肺分流性肺組織中低水平表達。而且，細胞學研究發(fā)現(xiàn)肺動脈內(nèi)皮細胞和肺動脈平滑肌細胞均能分泌NBL1，且這種分泌行為伴隨著細胞表型和細胞周期分布的改變，另外NBL1

7、能特異的拮抗BMP2/4對肺動脈內(nèi)皮細胞和肺動脈平滑肌細胞增殖的抑制作用。先天性心臟病病人和體肺分流性SD大鼠的外周血Elisa結(jié)果發(fā)現(xiàn)血漿NBL1水平隨著肺動脈高壓程度的加重而逐漸降低;而持續(xù)補充重組NBL1蛋白使體肺分流性SD大鼠肺動脈壓力進一步升高，肺血管重構(gòu)程度進一步加重。
　　 結(jié)論:分泌型蛋白質(zhì)NBL1主要高表達于正常肺組織。體肺分流性肺動脈高壓性肺組織中NBL1的表達水平降低且血漿NBL1濃度和肺動脈高壓的程度負相