生物堿類胃癌多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑的篩選及機制研究.pdf

1、目的：多藥耐藥性（MDR）是導致腫瘤化療失敗的主要原因之一，從中藥單體、復方中篩選高效、低毒的腫瘤耐藥逆轉(zhuǎn)劑是目前抗腫瘤藥物研究的新策略。本研究以人胃癌親本細胞系SGC7901和耐藥細胞系SGC7901/VCR為細胞模型，駱駝蓬堿（HM）、去氫駱駝蓬堿（HMI）、貝母素甲（PM）、貝母素乙（PMI）和氧化苦參堿（OMT）等5種生物堿類藥物為研究對象，體外篩選MDR逆轉(zhuǎn)劑，研究其耐藥逆轉(zhuǎn)活性及作用機制，為臨床治療多藥耐藥性胃癌提供逆轉(zhuǎn)策略

2、。
　　方法：
　?。?）MTT法檢測HM、HMI、PM、PMI和OMT的細胞毒性及耐藥逆轉(zhuǎn)效果；
　　（2）流式細胞儀檢測篩選出的貝母素乙對腫瘤細胞內(nèi)阿霉素（ADR）蓄積的影響；
　　（3）Western blot法檢測貝母素乙干預(yù)后P-糖蛋白（P-gp）的表達變化；
　　（4）流式細胞儀檢測貝母素乙誘導SGC7901/VCR細胞凋亡的百分率變化；
　?。?） Western blot法檢測貝母素乙

3、誘導細胞凋亡時 Bcl-2、Bax、Caspase-3和Cleaved caspase-3蛋白的表達差異；
　?。?）細胞免疫熒光法檢測貝母素乙誘導耐藥細胞凋亡的過程中Cleaved caspase-3蛋白表達差異。
　　結(jié)果：
　　（1）HM、HMI、PM、PMI和OMT均能不同程度的抑制親本細胞SGC7901和耐藥細胞SGC7901/VCR的增殖作用，非毒性劑量的貝母素乙能夠顯著提高 SGC7901/VCR細胞對化

4、療藥物長春新堿（VCR）、阿霉素、5-氟尿嘧啶（5-Fu）、順鉑（CDDP）敏感性。
　?。?）非毒性劑量的貝母素乙能夠顯著提高 SGC7901/VCR細胞內(nèi) ADR的蓄積，降低P-gp的表達。
　?。?）貝母素乙聯(lián)合5-Fu可誘導耐藥細胞凋亡：
　　①流式細胞儀結(jié)果顯示：對照組單獨使用貝母素乙或5-Fu時，細胞凋亡百分率小于15％，實驗組聯(lián)合用藥時，細胞凋亡百分率分別為：17.8%、29.5%、44.5%；
　

5、?、赪estern blot法檢測結(jié)果顯示：實驗組和對照組的Bcl-2和Bax蛋白表達差異無統(tǒng)計學意義，而Caspase-3和Cleaved caspase-3蛋白表達呈劑量依賴性和時間依賴性增加。
　?、奂毎庖邿晒夥z測證明了貝母素乙聯(lián)合5-Fu可誘導耐藥細胞凋亡，其凋亡機制與激活Caspase-3產(chǎn)生Cleaved caspase-3剪切體的相關(guān)。
　　結(jié)論：貝母素乙能夠作為胃癌多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑逆轉(zhuǎn)MDR，其逆轉(zhuǎn)機制與下