新型多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑的發(fā)現(xiàn)及功能評價.pdf

1、多藥耐藥(MDR,multidrug resistance)是目前癌癥化療失敗最主要的因為。而最為人所熟知的多藥耐藥機制是癌細(xì)胞表面過表達(dá)的藥物外排泵將其底物抗腫瘤藥排出胞外,從而降低藥物在細(xì)胞內(nèi)的積累。P-糖蛋白(Pgp／MDR1／ABCB1,P-glycoprotein)和乳腺癌耐藥蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)這兩種蛋白是ABC轉(zhuǎn)運體家族成員,行使依賴于ATP水解供能的藥物外排功

2、能。PgP和BCRP均可轉(zhuǎn)運多種藥物形成多藥耐藥并伴隨藥物動力學(xué)改變。目前一種最主要的克服多藥耐藥的方法是抑制轉(zhuǎn)運體的外排作用。一些ABC轉(zhuǎn)運體的抑制劑(化療增敏劑)已經(jīng)開發(fā)出來,但細(xì)胞毒效應(yīng)及藥代動力學(xué)方面的副作用阻礙了它們在臨床上的應(yīng)用。潛在的新高效逆轉(zhuǎn)劑開發(fā)研究已十分緊迫。
　　 目的:發(fā)現(xiàn)能夠抑制P-糖蛋白和BCRP外排作用的全新機構(gòu)的先導(dǎo)化合物,并對這些抑制劑作用于這兩種的轉(zhuǎn)運體蛋白的機制進(jìn)行探討。
　　 方法

3、:選用PgP過表達(dá)的細(xì)胞系K562／A02和MCF-7／ADR和BCRP過表達(dá)的細(xì)胞系HEK-293／BCRP和MCF-7／MX作為多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑的體外篩選模型。根據(jù)數(shù)據(jù)庫提供的包含近約200,000個可商業(yè)購買的有機小分子化合物(www.spec.net)進(jìn)行分子結(jié)構(gòu)多樣性分析。再依據(jù)聚類分析,經(jīng)過基于物理化學(xué)特性預(yù)測、化學(xué)穩(wěn)定性、潛在毒性和代謝的類藥性分析,挑選了187個代表性化合物作為生物學(xué)檢測的備選化合物。這187種化合物(編號

4、C71-C196,C1-C61)首先經(jīng)過流式細(xì)胞技術(shù)初篩選具有潛在抑制功能的備選個體,再經(jīng)過熒光底物(包括羅丹明123、阿霉素、米托蒽醌)外排的抑制鑒定、mRNA及蛋白表達(dá)的檢測,細(xì)胞毒增敏和ATP水解酶活性的檢測進(jìn)行評價。
　　 結(jié)果:成功建立了靶向Pgp和BCRP的逆轉(zhuǎn)劑的篩選評價模型?；谏鲜鱿到y(tǒng)篩選得到的C95號是安全有效的Pgp逆轉(zhuǎn)劑(由羅丹明123外排實驗和細(xì)胞毒實驗得到),并好于陽性對照維拉帕米。RT-PCR和We