健康老年人腸道中腸桿菌科細菌的分布及腸集聚性大腸埃希菌(EAEC)毒力基因和超廣譜β內酰胺酶的研究.pdf

1、目的:
　　應用常規(guī)細菌培養(yǎng)法和分子生物學技術，分析健康老年人腸道菌群，以期獲得杭州市健康老年人腸道中腸桿菌科細菌的分布及其耐藥情況;并對分離的大腸埃希菌作腸集聚性大腸埃希菌（EAEC）的毒力基因檢測及超廣譜β內酰胺酶的研究。
　　方法:
　　收集175例60周歲以上健康體檢者的糞便標本，將其分別接種于血平板、SS平板、麥康凱平板，37℃孵育進行細菌培養(yǎng)，挑取單個菌落用Vitek-2 Compact全自動微生物鑒定儀和

2、MALDI-TOF MS質譜儀鑒定細菌到種;采用K-B紙片擴散法檢測IPM、CIP、FOX、CTX、AMC的藥敏試驗結果;采用雙紙片協(xié)同法篩查產ESBLs菌株;陽性菌株用PCR法擴增blaCTX-M-1組、blaCTX-M-2組、blaCTX-M-8組、blaCTX-M-9組，測序結果與GenBank上比對其耐藥基因;對分離的大腸埃希菌用PCR法擴增2個EAEC毒力基因:astA、aggR，測序結果與GenBank上進行比對。
　

3、　結果:
　　在175例研究對象中，有59.4％(104/175)的健康老年人腸道中只有一種腸桿菌科細菌，有2種腸桿菌科細菌的為67例(38.3％)，3種腸桿菌科細菌的為1例(0.6％)，;細菌種類以大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌為主，分別占91.4％、29.7％。其他還分離到陰溝腸桿菌、產氣腸桿菌、檸檬酸桿菌屬、變形桿菌屬、變棲克雷伯菌、產堿普羅威登斯菌、居泉沙雷菌等。大腸埃希菌對亞胺培南(IPM)、頭孢噻肟(CTX)、阿莫西林/克拉

4、維酸(AMC)、頭孢西丁(FOX)、環(huán)丙沙星（CIP）的耐藥率分別為0％、27.9％、4.5％、1.3％和37.0％;肺炎克雷伯菌對亞胺培南（IPM）、頭孢噻肟(CTX)、阿莫西林/克拉維酸(AMC)、頭孢西丁(FOX)、環(huán)丙沙星(CIP)的耐藥率分別為1.9％、5.8％、1.9％、1.9％和3.8％;兩者相比較，大腸埃希菌對頭孢噻肟(CTX)、環(huán)丙沙星（CIP）的耐藥率明顯高于肺炎克雷伯菌(P＜0.05)。其中有一株肺炎克雷伯菌對所測

5、抗生素全耐藥。超廣譜β-內酰胺酶(ESBLs)總攜帶率為28.2％，其中大腸埃希菌的攜帶率(36.3％)明顯高于肺炎克雷伯菌(19.2％)(P＜0.05);60％的產ESBLs菌株檢測到CTX-M基因型，其中以CTX-M-14最多，占57.8％，其他還檢測到CTX-M-3、CTX-M-15、CTX-M-55、CTX-M-64、CTX-M-24、CTX-M-27和CTX-M-65基因型。
　　160株大腸埃希菌共檢出EAEC16(1

6、0％)株，其中astA陽性14株，檢出率為:8.75％; aggR陽性2株，檢出率為:1.25％; EAEC菌株的ESBL攜帶率為:56.25％(9/16);產ESBLs大腸埃希菌EAEC的檢出率(15.51％)要明顯高于非產ESBLs菌株(6.86％)(P＜0.05);沒有發(fā)現(xiàn)在同一株菌株中同時攜帶astA和aggR基因;在同一位健康者糞便中分離到2株大腸埃希菌，1株產CTX-M-14同時攜帶astA毒力基因，另外一株為敏感菌株，攜帶

7、aggR基因。
　　結論:
　　1、健康老年人腸道中腸桿菌科細菌的耐藥率和ESBL的檢出率較高，檢出一株泛耐藥肺炎克雷伯菌。
　　2、產ESBLs的腸桿菌科細菌60.0％為CTX-M基因型，其中以CTX-M-14為主。
　　3、本研究首次對健康老年人腸道分離的大腸埃希菌進行了EAEC的檢測，發(fā)現(xiàn)毒力基因的檢出率為10％。
　　4、首次發(fā)現(xiàn)產ESBLs大腸埃希菌EAEC的檢出率要高于非產ESBLs菌株。