基于金納米籠的腫瘤標(biāo)志物檢測及細(xì)胞成像研究.pdf

1、第一部分：
　　三磷酸腺苷(ATP)是生物體內(nèi)最小的能量單位，是生物體內(nèi)細(xì)胞所有生命活動(dòng)的能量來源，對于維持生物體正常的機(jī)能具有至關(guān)重要的作用。在細(xì)胞受損或死亡后，細(xì)胞內(nèi)的ATP含量會(huì)明顯降低，所以ATP含量的變化可以用來反映細(xì)胞的變異和損傷，故通過檢測惡性腫瘤ATP濃度變化，可以了解其細(xì)胞代謝以及腫瘤化療中的整體細(xì)胞殺死量等情況。
　　金納米籠是一種形貌為中空、壁上多孔的納米立方體顆粒，它具有較大的光吸收截面，良好的光熱性

2、質(zhì)，較好的生物相容性，對光波具有非常寬的的散射和吸收范圍等一系列優(yōu)點(diǎn)。本文具體研究內(nèi)容如下:
　　一、銀納米立方體顆粒、金納米籠狀顆粒的合成:
　　本文采用乙二醇還原硝酸銀的方法合成銀納米立方體，合成的銀納米立方體顆粒在50-60nm。以銀納米立方體為模版，通過置換法合成金納米籠狀顆粒。紫外分光光度檢測與電子顯微鏡表征結(jié)果表明，我們合成了形貌良好的粒徑為60-70nm的金納米籠。
　　二、基于金納米籠的ATP生物傳感器

3、的制備與ATP的檢測:
　　本文利用金納米籠的空心籠狀結(jié)構(gòu)，在其內(nèi)部負(fù)載熒光物質(zhì)，采用巰基修飾的DNA鏈及其互補(bǔ)鏈包裹金納米籠，使熒光物質(zhì)封堵在籠內(nèi)。為了方便分離，將金納米籠組裝到磁珠上。在最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件下，可在5.0×10-8～1.0×10-6M范圍內(nèi)實(shí)現(xiàn)對ATP的檢測。該傳感器在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域具有較大的應(yīng)用潛力，可用于不同目標(biāo)分子的特異性檢測。為癌癥等重大疾病的早期診斷及治療提供新的途徑和方法。
　　三、ATP探針在細(xì)胞內(nèi)熒

4、光成像:
　　將金納米籠熒光探針置于含有腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)液中，激光共聚焦掃描顯微成像得到細(xì)胞的熒光成像圖片，結(jié)果表明，探針能夠與癌細(xì)胞內(nèi)的ATP反應(yīng)并釋放出熒光物質(zhì)。該體系有望應(yīng)用于運(yùn)載治療癌癥等重大疾病的藥物，實(shí)現(xiàn)藥物的靶向載遞及可控釋放。
　　第二部分：
　　谷胱甘肽(GSH)廣泛存在于生物體的細(xì)胞中，由于其結(jié)構(gòu)的特殊性，使得它能夠參與機(jī)體內(nèi)的多種生理過程，在維持生物體內(nèi)巰基和硫化物的平衡及調(diào)節(jié)生物體內(nèi)氧化還原環(huán)境方

5、面起著至關(guān)重要的作用。而人體內(nèi)的某些疾病的發(fā)生，也可以通過GSH含量的改變反映出來。所以，對細(xì)胞中GSH含量的檢測有著重要的意義。本文以新型硒二唑化合物作為電化學(xué)探針，通過測量其峰電流的降低情況可以測量出GSH的濃度，本文主要研究內(nèi)容如下:
　　一、對電活性物質(zhì)的電極反應(yīng)過程及其與GSH的反應(yīng)機(jī)理進(jìn)行研究:
　　新型電化學(xué)探針[1，3]-二硫雜環(huán)戊烯并[4,5-f]-2，1，3-苯并硒二唑-6-硫酮(DBT)的分子結(jié)構(gòu)中含有

6、Se-N鍵，具有較強(qiáng)的電化學(xué)活性，它與GSH反應(yīng)后，Se-N鍵會(huì)發(fā)生斷裂，因此利用此電化學(xué)物質(zhì)檢測GSH，不但反應(yīng)速度快、靈敏度高，而且還具有良好的選擇性。利用循環(huán)伏安法(CV)和示差脈沖伏安法(DPV)推導(dǎo)出DBT和GSH的反應(yīng)機(jī)理。DBT對GSH的檢測范圍為:1.0×10-10～9.0×10-10M，線性相關(guān)系數(shù)為R=0.9920。
　　二、對Ramos細(xì)胞中的巰基物進(jìn)行了檢測:
　　為了研究DBT對生物試樣的檢測效果，