多發(fā)性骨髓瘤易感基因和分子預(yù)后標(biāo)記的相關(guān)性研究.pdf

1、第一章 TNF-α基因啟動(dòng)子區(qū)多態(tài)性與多發(fā)性骨髓瘤相關(guān)性及對(duì)沙利度胺聯(lián)合地塞米松治療方案骨髓瘤患者預(yù)后的影響
　　 背景及目的：盡管腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor alpha，TNF-α）啟動(dòng)子區(qū)-238和-308單苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism，SNP）被認(rèn)為是功能性的多態(tài)性位點(diǎn)，然而它與多發(fā)性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）]的患病風(fēng)險(xiǎn)目前

2、仍無一致的結(jié)論。大大提高治療效果的新藥-沙利度胺通過影響TNF-α的生成，減少NF-k B的活化發(fā)揮抗骨髓瘤作用。因此本研究旨在觀察TNF-α啟動(dòng)子區(qū)-238和-308多態(tài)性與多發(fā)性骨髓瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性及評(píng)估其多態(tài)性對(duì)沙利度胺聯(lián)合地塞米松治療方案的刪患者療效及預(yù)后影響。
　　 方法：采用聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）-限制性片段長度多態(tài)性（restriction fragment l

3、ength polymorphism，RFLP）方法檢測(cè)了中國漢族210例多發(fā)性骨髓瘤患者和218例健康對(duì)照者的TNF-α啟動(dòng)子區(qū)-238和-308位點(diǎn)多態(tài)性狀態(tài)，同時(shí)應(yīng)用單變量和多變量分析方法評(píng)估98例接受沙利度胺聯(lián)合地塞米松治療方案的MM患者療效及預(yù)后。
　　 結(jié)果：TNF-α基因-308位點(diǎn)的GA基因型和GA+AA基因型降低MM的患病風(fēng)險(xiǎn)，差異有顯著性P=0.01和P=0.02，是一種保護(hù)性的因素（OR0.51和0R0.5

4、5）。當(dāng)聯(lián)合TNF-α-238和TNF-α-308位點(diǎn)SNP基因型分析時(shí)，GG/GA基因型減少M(fèi)M的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)（P=0.03）。TNF-α-238位點(diǎn)GA+AA基因型較GG型患者具有長的無進(jìn)展生存時(shí)間（progression-free survival，PFS，P=0.009）和更長的總生存時(shí)間（overallsurvival，OS，P=0.088）。結(jié)合患者年齡、β2-M，TNF-α-238和-308基因型的多因素分析中，TNF-α-2

5、38具有獨(dú)立的良好PFS預(yù)后意義（P=0.048）。然而，TNF-α-308的多態(tài)性狀態(tài)無論在單因素及多因素分析中，均未觀察到對(duì)治療效果及預(yù)后的影響。
　　 結(jié)論：TNF-α基因啟動(dòng)子區(qū)-308位點(diǎn)多態(tài)性與多發(fā)性骨髓瘤疾病相關(guān)，可降低MM患病風(fēng)險(xiǎn)；而TNF-α-238多態(tài)性GA+AA基因型對(duì)沙利度胺具有良好的療效，并延長PFS和OS。因此，TNF-α基因啟動(dòng)子區(qū)多態(tài)性可作為潛在的評(píng)估骨髓瘤疾病患病風(fēng)險(xiǎn)及沙利度胺治療刪療效和預(yù)后的

6、分子標(biāo)記。
　　 第二章NF-k B信號(hào)通路相關(guān)基因多態(tài)性對(duì)多發(fā)性骨髓瘤疾病及基于硼替佐米治療方案患者預(yù)后的影響
　　 背景及目的：NF-κB是一組具有特殊DNA結(jié)合序列的轉(zhuǎn)錄因子，在MM細(xì)胞的周期調(diào)節(jié)、細(xì)胞生存、抗凋亡、細(xì)胞因子的產(chǎn)生等方面發(fā)揮重要作用。目前，通過阻斷NF-κB通路為作用靶點(diǎn)的蛋白酶體抑制劑-硼替佐米（Bortezomib）已廣泛應(yīng)用于臨床，大大提高了MM患者的反應(yīng)率及生存期，然而所有患者都將最終復(fù)發(fā)、

7、耐藥，導(dǎo)致無法治愈。本研究旨在通過對(duì)NF-κB信號(hào)通路上的關(guān)鍵分子，IκBα、NFκB2和TRAF3基因的多態(tài)性位點(diǎn)檢測(cè)，觀察其與MM疾病發(fā)病的相關(guān)性，同時(shí)評(píng)估對(duì)基于硼替佐米治療的MM患者預(yù)后的影響。
　　 方法：根據(jù)NCBI及HapMap中基因標(biāo)簽所記錄的最小等位基因頻率（minor allelefrequency，MAF）在中國漢族人群比例>5％的原則，挑選IKBa、NFκB2和TRAF3基因26個(gè)SNP位點(diǎn)，采用飛行時(shí)間質(zhì)

8、譜（matrix assisted laser desorption ionizationtime of fl ight，MALDI-TOF）分析技術(shù)，對(duì)中國漢族215例MM患者和208例健康者進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)評(píng)估上述位點(diǎn)多態(tài)性狀態(tài)對(duì)基于硼替佐米治療方案的94例骨髓瘤患者預(yù)后的影響。
　　 結(jié)果：在所有檢測(cè)位點(diǎn)中，去除不符合哈-溫平衡（Hardy-Weinberg eguiliberum，HWE）及多態(tài)性基因型頻率太少的3個(gè)位點(diǎn)（

9、rs10131139、rs8023164和rs12435483），余下23個(gè)位點(diǎn)中，Iκ Bα基因的rs2233406和rs2233409位點(diǎn)多態(tài)性基因型與疾病相關(guān)，T等位基因?yàn)楸Ｗo(hù)性基因，其優(yōu)勢(shì)比（OR）及95％CI分別為0.623，0.394-0.984，（P=0.042）和0.638，0.386-1.056，（P=0.079）。TRAF3基因中rs7143468的A等位基因具有增加MM患病風(fēng)險(xiǎn)的可能性（OR1.539，95％CI：

10、0.968-2.448，P=0.068），而病例組中rs7143468A等位基因頻率明顯多于對(duì)照組（P=0.028），提示此類基因型可增加發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)（OR1.539，95％CI：0.968-2.448，P=0.068），且病例組rs12147254的A等位基因發(fā)生頻率明顯少于健康組（33.5％vs51.0％，P<0.0001），因而降低疾病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。在單體型分析中，TRAF3基因單體型1[GAACAG]頻率在MM組明顯少于健康組，降低發(fā)

11、病風(fēng)險(xiǎn)（P<0.0001，OR0.526）。余下的IKBa、TRAF3基因位點(diǎn)及所有NF k B2位點(diǎn)均未觀察到多態(tài)性狀態(tài)與發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性。
　　 TRAF3基因rs11160707位點(diǎn)GA+AA基因型較GG野生型PFS長（P=0.024）。NFκ B2基因rs12769316位點(diǎn)GA+AA基因型較GG野生型具有長的OS（P=0.038）；然而rs1056890位點(diǎn)CT+TT基因型較CC野生型其OS較短，表現(xiàn)預(yù)后不良（P=0.

12、018），這可能是由于rs12769316位點(diǎn)GA+AA基因型患者在接受基于硼替佐米治療方案時(shí)較野生型具有良好的總反應(yīng)率（CR+VGPR+PR）（89.7％vs69.8％，P=0.038），而rs1056890多態(tài)性基因型的總反應(yīng)率低于野生型（61.3％vs83.6％，P=0.018）。其余位點(diǎn)未觀察到多態(tài)性基因型與野生基因型在治療反應(yīng)率及臨床預(yù)后之間的差異。我們從多變量分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)TRAF3基因rs11160707是獨(dú)立的、良好的PF