沙利度胺對肺纖維化大鼠細(xì)胞間黏附分子、轉(zhuǎn)化生長因子表達(dá)的影響.pdf

1、目的:肺間質(zhì)纖維化（pumlonaryinterstitialfibrosis）是指原因不明并以普通型間質(zhì)性肺炎（UIP）為特征性病理改變的一種慢性炎癥性間質(zhì)性肺疾病，是特發(fā)性間質(zhì)性肺炎中最常見的類型。至今尚無有效治療藥物，中位生存期＜3年。以X線胸片改變及肺功能損害的異質(zhì)性疾病的總稱，以彌漫性的肺泡炎、肺實(shí)質(zhì)炎癥和間質(zhì)纖維化為病理特點(diǎn)。致肺纖維化的肺損傷的發(fā)生的始動因素目前還不清楚，一些人認(rèn)為可能與病毒感染、遺傳易感性、免疫功能的異常

2、等有關(guān)。各種因素?fù)p傷毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和肺泡上皮細(xì)胞，導(dǎo)致肺泡巨噬細(xì)胞的（AM）活化，中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞等炎癥細(xì)胞的浸潤，炎癥細(xì)胞和其釋放的炎癥遞質(zhì)和細(xì)胞因子介導(dǎo)了早期肺損傷。肺間質(zhì)纖維化傳統(tǒng)的治療包括:腎上腺糖皮質(zhì)激素（簡稱激素）治療、免疫抑制劑和抗纖維化制劑單獨(dú)或與激素聯(lián)合治療等。沙利度胺最早作為一種鎮(zhèn)靜劑和止痛劑，后來發(fā)現(xiàn)其具有免疫調(diào)節(jié)和抗炎作用。90年代，研究發(fā)現(xiàn)沙利度胺能夠較為特異地調(diào)節(jié)大鼠TNF-α的

3、水平，降低TNF-α，IL-6和IL-10mRNA的水平，從而抑制肺纖維化的進(jìn)程。
　　 本實(shí)驗(yàn)旨在研究沙利度胺對博來霉素致大鼠纖維化的干預(yù)作用。通過測量血清中ICAM-1、TGF-β1的表達(dá)水平探討可能的作用機(jī)制。
　　 方法:選取清潔及健康、雄性SD大鼠(由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供)72只，體重250-300g，先進(jìn)行適應(yīng)性飼養(yǎng)（時間為一周），之后隨機(jī)分為:(1)正常對照組（A組）:18只，將0.9％Nacl溶液

4、按照0.1ml/100g的方法注入氣管內(nèi)，并用0.9％Nacl溶液按照1ml/100g的方法灌胃（時間從假造模后第1日開始），1次/天，并分別在7天、14天、28天各處死6只，(2)模型組（B組博來霉素組）:18只大鼠，一次性用注射器將博來霉素A5(5mg/kg)均勻的注入氣管內(nèi)，并用0.9％Nacl溶液1ml/100g灌胃（時間從造模后第一日開始），1次/天，分別于7天、14天、28天分別處死6只。(3)沙利度胺干預(yù)組（C組）:大鼠1

5、8只，將博來霉素A5(5mg/kg)用注射器均勻的、一次性的注射入氣管，并于造成模型后第1天用1％的沙利度胺溶液（沙利度胺與0.9％Nacl溶液按比例配成）按照100mg/kg的方法灌胃，1次/天，分別于7天、14天、28天均處死6只。(4)地塞米松組干預(yù)組（D組）:大鼠18只，將博來霉素A5(5mg/kg)均勻的、一次性的向氣管內(nèi)注入，并從造成模型后第1天開始將地塞米松按照0.3mg/100g/d的方法腹腔內(nèi)注射，分別在7天、14天、

6、28天各處死6只。各組將雙側(cè)股動脈分離，注意盡量減少對股動脈的刺激，將股動脈游離后，用剪刀剪斷雙側(cè)股動脈，將血放凈，大鼠也同時被處死，取右肺上葉固定于4％多聚甲醛溶液中，用免疫組化法檢測ICAM-1、及TGF-β1并用圖像分析系統(tǒng)測量并記錄陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)及免疫組化評分(IOD)值。采用HE染色及Masson染色的方法來對各個組大鼠肺組織的肺泡炎程度及纖維化的發(fā)展程度進(jìn)行評價，同時按Szapiel[7-8]法進(jìn)行分級，可分為4級。用SPSS

7、13.0統(tǒng)計(jì)軟件對各個組數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果:
　　 1、肺組織病理分析結(jié)果:在同一時間點(diǎn)，博來霉素組肺泡炎程度明顯高于對照組(P＜0.05)，博來霉素組肺纖維化程度亦顯著高于對照組，7天時(P＞0.05)，14天、28天時(P＜0.05)，表明動物模型復(fù)制成功。沙利度胺組肺泡炎程度情況:7天、14天沙利度胺組肺泡炎程度較博來霉素組明顯減輕（P＜0.05），28天時正常對照組和模型組肺泡炎程度無差別(P＞0.05)

8、。纖維化程度:7天時正常對照組和模型組無差別(P＞0.05)，14天和28天時兩組均較正常對照組嚴(yán)重(P＜0.05)，14天時(P＞0.05)與模型組無差別，28天時(P＜0.05)較模型組纖維化程度減輕。地塞米松組肺泡炎情況:7天、14天較正常對照組重，較模型組輕(P＜0.05)，28天時與正常對照組和模型組比較無差別(P＞0.05)，纖維化程度:7天時較正常對照組和模型組無差異(P＞0.05)，14天時較對照組程度加重(P＜0.05

9、)，較模型組無差異(P＞0.05)，28天時較對照組無差異(P＞0.05)，較模型組減輕(P＜0.05)。在同一時間點(diǎn)，沙利度胺組與地塞米松的肺泡炎和纖維化程度均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 2、肺組織膠原蛋白的含量變化（IOD表示）:造模組大鼠肺組織Ⅲ型膠原蛋白的含量隨著造模時間的延長逐漸增高，28天達(dá)最高值，7天、14天、28天與對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);沙利度胺組和地塞米松組大鼠Ⅲ型膠原蛋白含量呈緩慢

10、增長趨勢，與模型組相比含量均較低(P＜0.05);但地塞米松組7天、沙利度胺組7天之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，14天、28天沙利度胺組Ⅲ型膠原蛋白含量較地塞米松組低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 3、血清中ICAM-1、TGF-β1含量變化
　　 模型組大鼠血清TGF-β1含量均顯著高于其他三組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，地塞米松組與沙利度胺組相比在7天、14天具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，在2

11、8天時無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 模型組大鼠血清中ICAM-1含量逐漸增高，至28天達(dá)到最大值，在相同時間點(diǎn)含量均高于正常對照組、地塞米松組和沙利度胺組。地塞米松組和沙利度胺組在7天、14天時差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，(P＜0.05)，在28天時無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、在博萊霉素誘導(dǎo)的大鼠肺間質(zhì)纖維化模型中，沙利度胺能夠減少肺間質(zhì)內(nèi)的膠原沉積，對于肺間質(zhì)纖維化具有一定治療作用。