2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題（含答案詳解+作文范文）_第1頁
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文檔簡介

1、華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文pHsamiR16shRNA真核表達(dá)載體的構(gòu)建、體外轉(zhuǎn)錄及其活性的鑒定姓名：呂婷婷申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：病原生物學(xué)指導(dǎo)教師：黃漢菊余冰20090523華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文23.將重組質(zhì)粒pHsamiR16shRNA轉(zhuǎn)染穩(wěn)定表達(dá)HBV的HepG2.2.15細(xì)胞，對細(xì)胞培養(yǎng)上清中的HBsAg和HBeAg進(jìn)行定量檢測，熒光定量PCR分別檢測mRNA和HBVDNA的抑制效果。結(jié)果1.構(gòu)建載體

2、：siR1583經(jīng)雙酶切鑒定，能夠獲得預(yù)期大小的目的片段；pHsamiR16shRNA經(jīng)PCR、雙酶切鑒定，可獲得預(yù)期大小片段；pHsamiR16shRNA經(jīng)Invitrogen公司測序證實(shí)，siR1583的編碼基因片段已經(jīng)正確插入pmiR16載體中。2.載體的功能鑒定及應(yīng)用：Elisa、RTPCR、熒光定量PCR的結(jié)果均表明：成功構(gòu)建的能同時(shí)表達(dá)人miR16和針對HBVX基因的shRNA雙表達(dá)載體pHsamiR16shRNA，其相對單

3、表達(dá)載體能更明顯地抑制HepG2.2.15細(xì)胞的HBsAg和HBeAg分泌，熒光定量PCR結(jié)果也證實(shí)了其抑制作用的優(yōu)勢。結(jié)論1.針對乙型肝炎病毒X基因的siRNA序列成功地克隆到真核表達(dá)載體pSuper上；2.成功構(gòu)建了能同時(shí)表達(dá)人miR16和針對HBVX基因的siRNA雙表達(dá)載體pHsamiR16shRNA；3.在對pHsamiR16shRNA與HBV復(fù)制關(guān)系的初步探索中，我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明雙表達(dá)載體表達(dá)的siRNA和miRNA分子對

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