脂肪來源的干細胞移植對腦梗塞大鼠的作用及其機制研究.pdf

1、目的：探討脂肪來源的干細胞(adipose-derivedstemcell，ADSC)移植對腦缺血大鼠的作用及其分子生物學(xué)機制，通過觀察ADSC移植對腦缺血大鼠腦組織中微血管生成和堿性成纖維生長因子(basicfibroblastgrowthfactor，bFGF)、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transformingrowthfactor，TGF-β1)和血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEG

2、F)的表達情況，為ADSC移植治療腦缺血性疾病及其機理提供實驗依據(jù)。 方法：1、體外分離培養(yǎng)ADSC，流式細胞儀檢測其表面標志。 2、實驗動物分組：大鼠隨機分為假手術(shù)組(Sham組)，局灶性腦缺血組(MCAO組)，溶劑對照組(vehicle組)和MCAO+ADSC治療組(ADSC組)。每組再分4d、7d、14d三個亞組，每組6只。 3、參考改良Zea-Longa線栓法制備大鼠大腦中動脈栓塞(middlecereb

3、ralarteryocclusion，MCAO)局灶性腦缺血模型。 4、羧基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺酯(carboxyfluoresceinsuccinimidylester，CFSE)體外標記ADSC。 5、ADSC移植：ADSC組于造模成功1d后經(jīng)側(cè)腦室注射入ADSC(內(nèi)含1×106細胞數(shù))，vehicle組注射等量磷酸緩沖鹽溶液(phosphate-bufferedsaline，PBS)。 6、取材與檢測

4、 6.1術(shù)后4d、7d和14d大鼠大腦灌注、取材、切片。 6.2熒光顯微鏡觀察CFSE標記的ADSC在體內(nèi)存活情況。 6.3免疫組織化學(xué)法檢測第VIII因子相關(guān)抗原表達情況。 6.4半定量RT-PCR法和免疫組織化學(xué)法檢測bFGF、TGF-β1和VEGF表達情況。 6.5激光共聚焦顯微鏡觀察CFSE標記的ADSC在體內(nèi)分泌生長因子bFGF、TGF-β1和VEGF的情況。 7、統(tǒng)計學(xué)分析。

5、 結(jié)果：1、ADSC組梗死灶周圍的紋狀體及額頂皮質(zhì)下腦組織中可觀察到CFSE標記的的陽性細胞。 2、第Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫組織化學(xué)法結(jié)果顯示大鼠腦缺血后缺血區(qū)即可見大量的微血管生成。ADSC組較MCAO組和vehicle組缺血區(qū)微血管密度明顯增高(P<0.01)且隨時間延長表達持續(xù)增多。 3、半定量RT-PCR法和免疫組織化學(xué)法結(jié)果顯示ADSC組bFGF、TGF-β1和VEGF的表達在各個時間點均明顯高于MCAO組和v