人肥大細(xì)胞羧肽酶ELISA檢測(cè)方法的建立及其真核表達(dá)載體的構(gòu)建.pdf

1、[目的]
　　 1.建立人肥大細(xì)胞羧肽酶(human mast cell carboxypeptidase,hMC-CP)的雙抗體夾心ELISA檢測(cè)方法。
　　 2.構(gòu)建hMC-CP真核表達(dá)載體。
　　 [方法]
　　 1.hMC-CP的ELISA方法的建立
　　 (1)按方陣滴定法進(jìn)行雙抗體工作濃度的確定
　　 (2)重復(fù)性實(shí)驗(yàn)
　　 (3)靈敏度實(shí)驗(yàn)
　　 (4)利用上

2、述建立的ELISA方法,檢測(cè)臨床血清標(biāo)本中的hMC-CP。
　　 2.hMC-CP真核表達(dá)載體的構(gòu)建
　　 (1)設(shè)計(jì)特異引物,擴(kuò)增完整的hMC-CP編碼區(qū)基因,亞克隆入真核表達(dá)質(zhì)粒 pcDNA3.1,構(gòu)建hMC-CP真核表達(dá)載體。
　　 (2)設(shè)計(jì)特異引物,用人免疫球蛋白κ鏈的信號(hào)肽編碼序列置換hMC-CP基因自身信號(hào)肽編碼序列,擴(kuò)增產(chǎn)物亞克隆入真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1,構(gòu)建hMC-CP分泌型真核表達(dá)載體。

3、
　　 [結(jié)果]
　　 1.成功建立了hMC-CP的雙抗體夾心EIASA檢測(cè)方法。
　　 2.用建立的ELISA方法初步檢測(cè)了塵螨過敏患者的血清和正常對(duì)照者的血清,結(jié)果顯示塵螨過敏患者血清中hMC-CP的水平顯著高于正常對(duì)照血清組(p＜0.01)。
　　 3.成功構(gòu)建帶有自身信號(hào)肽編碼序列的hMC-CP的真核表達(dá)載體。
　　 4.成功構(gòu)建了含人免疫球蛋白κ鏈信號(hào)肽編碼序列的hMC-CP的分泌型真核