腎炎寧對IgA腎病大鼠腎臟組織型纖溶酶原激活物及纖溶酶原激活物抑制劑-1表達的影響.pdf

1、目的:IgA腎病(IgAnephropathy,IgAN)是指IgA或以IgA為主的免疫球蛋白呈團塊狀沉積于腎小球系膜區(qū)及毛細血管袢的一種原發(fā)性腎小球疾病,臨床表現(xiàn)以血尿為主,可伴有不同程度的蛋白尿、高血壓及腎功能的損傷,是我國常見的腎小球疾病之一,也是導致終末期腎衰的主要原因之一。目前認為,腎小球硬化和腎間質纖維化是導致多種腎臟疾病發(fā)展為終末期腎衰的主要原因,而細胞外基質(extracellularmatrix,ECM)的積聚則是導致

2、腎小球硬化的重要因素。
　　 IgAN光鏡下的表現(xiàn)多種多樣,從正常到各種增殖硬化的腎小球病變均可見到;電鏡下可見不同程度的系膜細胞增殖和系膜基質擴張,常見大塊的電子致密物沉積在系膜基質中。
　　 腎組織的免疫熒光檢查是診斷本病的特異性檢查,其特征性的表現(xiàn)是腎小球系膜區(qū)可見IgA或以IgA為主的免疫球蛋白呈團塊狀的彌漫性沉積,部分可沿毛細血管袢沉積。
　　 由于本病發(fā)病機制尚未完全明確,且臨床表現(xiàn)及病理改變呈現(xiàn)多樣

3、化,因此對本病的治療尚未制定出統(tǒng)一的方案。目前主要的治療藥物包括腎上腺糖皮質激素、免疫抑制劑(環(huán)磷酰胺、酶酚酸酯、硫唑嘌呤和環(huán)孢菌素A等)、血管緊張素轉化酶抑制劑(Angiotensin1-converting enzymeinhibitors,ACEI)及血管緊張素受體拮抗劑(Angiotensin receptor blockers,ARB)等,但由于腎上腺糖皮質激素和免疫抑制劑臨床應用副作用較大,患者依從性差。近年來研究發(fā)現(xiàn)中藥治

4、療IgAN具有多途徑、多靶點、低不良反應的特點,但其作用機制復雜,因此積極研究探求對IgAN大鼠腎損傷具有良好治療作用的中藥復方,并探討及其可能的作用機制,對預防和延緩IgAN的發(fā)生發(fā)展具有重大意義。
　　 本實驗通過觀察腎炎寧對IgAN大鼠24h尿蛋白定量、血肌酐(Serumcreatinine,Scr)、尿素氮(Urea nitrogen,BUN)及。腎組織中組織纖溶酶原激活物(tissue-type plasminogen

5、 activator,tPA)及纖溶酶原激活物抑制劑-1(plasminogen activator inhibitor1,PAI-1)表達水平的影響,并以臨床常用藥雷公藤多苷片為對照藥物,探討該方對IgAN的治療效果及其可能的作用機制,為中醫(yī)藥治療IgAN提供實驗依據(jù)。
　　 方法:40只健康雄性SD大鼠按體重隨機分為正常組、模型組、腎炎寧組及雷公藤多苷組,每組各10只。適應性飼養(yǎng)1周后,除正常組外,給予模型組、腎炎寧組及雷公

6、藤多苷組大鼠隔日口服牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)酸化水6周,正常組給予常規(guī)飲水,此后,給予模型組、腎炎寧組及雷公藤多菅組大鼠每周連續(xù)3次尾靜脈注射BSA緩沖液,連續(xù)6周,并于實驗第9周起對上述3組大鼠尾靜脈注射葡萄球菌腸毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB),每周1次,連續(xù)3周以制備IgAN動物模型,正常組尾靜脈注射相當劑量的生理鹽水。于實驗開始后第10周給予腎炎寧

7、組大鼠腎炎寧煎劑(18.7g/kg.d)灌胃,給予雷公藤多苷組大鼠雷公藤多甙片(10mg/kg·d)灌胃,正常組、模型組均灌服等量雙蒸水,連續(xù)灌胃8周。分別于造模前、7周末、9周末、13周末、17周末用代謝籠收集各組大鼠24h尿液,測定24h尿蛋白含量。17周末麻醉大鼠,股動脈取血,分離血清,檢測血清Scr、BUN,留取腎臟組織,行HE、六胺銀染色及免疫熒光檢查,觀察大鼠腎小球的病理變化,免疫組化及聚合酶鏈式反應(polymerase

8、chain reaction,PCR)測定腎組織中t-PA、PAI-1水平。
　　 結果:
　　 1.腎炎寧對IgAN大鼠24h尿蛋白定量的影響
　　 1.1.不同時期各組大鼠尿蛋白比較:
　　 正常組大鼠造模前、第7周末、第9周末、第13周末、第17周末尿蛋白比較均無明顯差異(P＞0.05)。
　　 模型組大鼠第7周末與造模前比較2蛋白明顯升高(P＜0.05);第9周末與第7周末比較尿蛋白亦明顯

9、升高(P＜0.05);第9周末、第13周末、第17周末組間比較,無明顯差異(P＞0.05)。
　　 腎炎寧組大鼠第7周末與造模前比較尿蛋白明顯升高(P＜0.05);第9周末與第7周末比較尿蛋白亦明顯升高(P＜0.05);第13周末與第9周末比較尿蛋白明顯降低(P＜0.05);第17周末與第13周末比較尿蛋白亦明顯降低(P＜0.05)。
　　 雷公藤多苷組大鼠第7周末與造模前比較尿蛋白明顯升高(P＜0.05);第9周末與第

10、7周末比較尿蛋白亦明顯升高(P＜0.05);第13周末與第9周末比較尿蛋白明顯降低(P＜0.05);第17周末與第13周末比較尿蛋白亦明顯降低(P＜0.05)。
　　 1.2.同一時期各組大鼠尿蛋白比較:
　　 造模前正常組、模型組、腎炎寧組雷公藤多苷組大鼠尿蛋白比較均無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 第7周末,與正常組相比,模型組、腎炎寧組、雷公藤多苷組大鼠尿蛋白均明顯升高(P＜0.05);模型組、腎炎寧組

11、、雷公藤多苷組各組間比較無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 第9周末,與正常組相比,模型組、腎炎寧組、雷公藤多苷組大鼠尿蛋白均明顯升高(P＜0.05);模型組、腎炎寧組、雷公藤多苷組各組間比較無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 第13周末,與正常組相比,模型組、腎炎寧組、雷公藤多苷組大鼠尿蛋白均明顯升高(P＜0.05);與模型組相比,腎炎寧組、雷公藤多苷組大鼠尿蛋白明顯降低(P＜0.05);雷公藤多苷組與腎炎寧組大鼠

12、尿蛋白比較,無明顯差異(P＞0.05)。
　　 第17周末,與正常組相比,模型組、腎炎寧組、雷公藤多苷組大鼠尿蛋白均明顯升高(P＜0.05);與模型組相比,腎炎寧組、雷公藤多苷組大鼠尿蛋白明顯降低(P＜0.05);雷公藤多苷組與腎炎寧組大鼠尿蛋白比較,無明顯差異(P＞0.05)。
　　 2.腎炎寧對IgAN大鼠Scr、BUN的影響正常組、模型組、腎炎寧組、雷公藤多苷組血清Scr、BUN比較:各組間差異均不明顯(P＞0.0

13、5)。
　　 3.腎臟病理形態(tài)學觀察光鏡下,正常組腎小球結構完整,腎小球系膜、基質未見明顯異常改變;模型組可見腎小球系膜細胞增生、系膜基質增多;雷公藤多苷片組與腎炎寧組也均有不同程度病理改變,但與模型組相比病變減輕。
　　 免疫熒光觀察:正常組腎小球系膜區(qū)無免疫復合物沉積,模型組可見免疫復合物沿腎小球系膜呈團塊狀分布,雷公藤多苷片組和腎炎寧組也有不同程度的免疫復合物沉積,但較模型組減輕。
　　 4.免疫組化和RT

14、-PCR對腎臟組織中PAI-1和t-PA表達的影響
　　 4.1.大鼠腎組織PAI-1蛋白及其基因表達的影響免疫組化染色顯示:與正常組相比,模型組、腎炎寧組和雷公藤多苷組大鼠腎組織PAI-1的陽性表達增強(P＜0.05);與模型組比較,雷公藤多苷組與腎炎寧組大鼠腎組織PAI.1的陽性表達減弱(P＜0.05)。
　　 RT-PCR結果顯示:與正常組相比,模型組、腎炎寧組和雷公藤多苷組大鼠腎組織PAI-1 mRNA明顯升高(

15、P＜0.05);與模型組比較,雷公藤多苷組與腎炎寧組大鼠腎組織PAI-1 mRNA明顯降低(P＜0.05)。
　　 4.2.大鼠腎組織t-PA.蛋白及其基因表達的影響免疫組化染色顯示:與正常組相比,模型組、腎炎寧組和雷公藤多苷組大鼠腎組織t-PA陽性表達增強(P＜0.05);模型組、雷公藤多苷組、腎炎寧組大鼠腎組織t-PA表達無明顯差異(P＞0.05)。
　　 RT-PCR結果顯示:與正常組相比,模型組、腎炎寧組和雷公藤

16、多苷組的t-PA mRNA水平顯著升高(P＜0.05);模型組、雷公藤多苷組、腎炎寧組大鼠腎組織t-PAtuRNA水平無明顯差異(P＞0.05)。
　　 結論:
　　 1.腎炎寧能明顯降低IgAN大鼠尿蛋白,從而保護腎功能。
　　 2.腎炎寧可減輕腎組織的病理損害,延緩IgAN的進展。
　　 3.腎炎寧能夠抑制PAI-1的合成,從而維持細胞外基質降解與合成的平衡狀態(tài),防止腎小球硬化及腎間質纖維化,延緩腎臟