尿激酶型纖溶酶原激活物在人肺癌細(xì)胞中表達(dá)調(diào)控的研究.pdf

1、復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文y76S914學(xué)棱代碼：10246學(xué)號(hào)：0091018尿激酶型纖溶酶原激活物在人肺癌細(xì)胞中表達(dá)調(diào)控的研究院系(所)：專(zhuān)業(yè)：姓名：導(dǎo)師：導(dǎo)孵組成燙：完成日期：上海醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分予生物學(xué)堂暢朱運(yùn)松教授寒后燕教授馬端教授2005年4月博上學(xué)位論文尿激酶型纖溶酶原激活物在人肺癌細(xì)胞中表達(dá)調(diào)控的研究摘要尿激酶型纖溶酶原激活物在人肺癌細(xì)胞中表達(dá)調(diào)控的研究捅要轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤患者死亡的主要原因，腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移是個(gè)多步驟、多階段有

2、序的復(fù)雜過(guò)程，它涉及細(xì)胞粘附、移動(dòng)以及細(xì)胞基質(zhì)的降解和重塑的復(fù)雜過(guò)程，一系列的蛋白水解酶如纖溶酶、基質(zhì)金屬蛋白酶、組織蛋白酶等參與此過(guò)程，其中尿激酶型纖溶酶原激活劑(uPA)在這一過(guò)程中發(fā)揮重要的作用。uPA是一種絲氨酸蛋白水解酶，新合成的uPA是分子量約54kD的單鏈酶原，uPA與腫瘤細(xì)胞表面的受體(uPAR)結(jié)合，使uPA濃集于細(xì)胞表面，活性形式的uPA其絲氨酸蛋白酶結(jié)構(gòu)域可水解激活纖溶酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w溶酶，纖溶酶可直接降解基質(zhì)組分或進(jìn)

3、一步激活金屬蛋白酶降解基質(zhì)，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。uPA與uPAR結(jié)合后還可介導(dǎo)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)作用，引起細(xì)胞內(nèi)一系列與細(xì)胞增殖、細(xì)胞遷移以及新生血管形成相關(guān)的基因表達(dá)，有利于腫瘤細(xì)胞的侵襲。大量的臨床研究表明，在高侵襲性的惡性腫瘤中，uPA的表達(dá)都明顯升高，與患者的預(yù)后不良明顯相關(guān)。盡管在轉(zhuǎn)錄后和蛋白質(zhì)水平的調(diào)節(jié)也起著一定的作用，但大量的文獻(xiàn)報(bào)道uPA基因表達(dá)的調(diào)節(jié)主要在轉(zhuǎn)錄水平。因此，研究uPA在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)調(diào)控機(jī)制對(duì)于抑制細(xì)胞間基

4、質(zhì)的水解從而抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移很重要。目前uPA的啟動(dòng)子已克隆測(cè)序，研究表明，uPA啟動(dòng)子位于轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游1980bp處有一含有兩個(gè)APl位點(diǎn)的增強(qiáng)子序列，它在調(diào)節(jié)uPA啟動(dòng)子活性中起主要作用。在兩個(gè)API位點(diǎn)之間有一74bp的增強(qiáng)子協(xié)調(diào)區(qū)(COM)，文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)在COM區(qū)可分為兩部分，即上游的uCOM區(qū)，其序列為caatcagcatgacagcct，和下游的dCOM區(qū)，序列為atctggagtcatgagagct，EMSA的結(jié)果顯示在uC

5、OM區(qū)分別有四個(gè)反式因子與其結(jié)合，分別為UEFl、UEF2、UEF3和UEF4，在dCOM區(qū)有兩個(gè)反式調(diào)節(jié)因子與其結(jié)合，分別為UEFl和UEF2，這些反式因子與COM區(qū)結(jié)合后協(xié)調(diào)APl位點(diǎn)的主要反式轉(zhuǎn)錄因子發(fā)揮增強(qiáng)子的活性，目前UEF2、UEF3和UEF4的cDNA已先后被克隆，其表達(dá)產(chǎn)物已被純化獲得，它們協(xié)調(diào)APl對(duì)uPA增強(qiáng)子的調(diào)節(jié)功能已基本明確。而在uCOM區(qū)和dCOM區(qū)都發(fā)揮作用的UEFl至今仍未被克隆和鑒定。對(duì)COM區(qū)UEFl