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1、尿激酶型纖溶酶原激活劑受體(urokinase receptor,uPAR)基因的表達與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān).我們以肺巨細胞癌高轉(zhuǎn)移株95D和低轉(zhuǎn)移株95C為細胞模型,在轉(zhuǎn)錄水平探討了uPAR差異表達的原因,以期為抗腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移提供一定的理論依據(jù).為了探討uPAR基因在轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控機制,分析該基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控與細胞侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系,該論文對uPAR基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控進行了以下的研究:1,Matrigel體外侵襲實驗及Western blot
2、檢測證實了uPAR基因的表達水平與細胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力存在正相關(guān).2,分別用3對引物從兩株細胞中拷貝出2238bp的uPAR啟動子,測序及瞬時轉(zhuǎn)染實驗尋找uPAR啟動子序列是否存在引起該基因差異表達的重要突變位點.3,以正常人uPAR基因啟動子的熒光素酶報告基因質(zhì)粒為基礎(chǔ),通過構(gòu)建系統(tǒng)缺失克隆,瞬時轉(zhuǎn)染細胞并測定熒光素酶報告基因活性,確定影響uPAR基因差異轉(zhuǎn)錄必需的啟動子區(qū)域.4,對影響uPAR基因差異表達的啟動子區(qū)域做連接體掃描突變,
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