尿激酶型纖溶酶原激活劑受體在人肺巨細(xì)胞癌高低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株中表達(dá)調(diào)控的研究.pdf

1、尿激酶型纖溶酶原激活劑受體(urokinase receptor,uPAR)基因的表達(dá)與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān).我們以肺巨細(xì)胞癌高轉(zhuǎn)移株95D和低轉(zhuǎn)移株95C為細(xì)胞模型,在轉(zhuǎn)錄水平探討了uPAR差異表達(dá)的原因,以期為抗腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移提供一定的理論依據(jù).為了探討uPAR基因在轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控機(jī)制,分析該基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控與細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系,該論文對(duì)uPAR基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控進(jìn)行了以下的研究:1,Matrigel體外侵襲實(shí)驗(yàn)及Western blot

2、檢測(cè)證實(shí)了uPAR基因的表達(dá)水平與細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力存在正相關(guān).2,分別用3對(duì)引物從兩株細(xì)胞中拷貝出2238bp的uPAR啟動(dòng)子,測(cè)序及瞬時(shí)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)尋找uPAR啟動(dòng)子序列是否存在引起該基因差異表達(dá)的重要突變位點(diǎn).3,以正常人uPAR基因啟動(dòng)子的熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒為基礎(chǔ),通過構(gòu)建系統(tǒng)缺失克隆,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞并測(cè)定熒光素酶報(bào)告基因活性,確定影響uPAR基因差異轉(zhuǎn)錄必需的啟動(dòng)子區(qū)域.4,對(duì)影響uPAR基因差異表達(dá)的啟動(dòng)子區(qū)域做連接體掃描突變,