血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)平滑肌細(xì)胞和巨噬細(xì)胞表達(dá)組織因子和尿激酶型纖溶酶原激活物受體的研究.pdf

1、背景:隨著研究的深入，腎素-血管緊張素系統(tǒng)目前被認(rèn)為是血管疾病病理生理中重要的環(huán)節(jié)，其中研究最多的就是AngⅡ的作用。AngⅡ與動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病關(guān)系密切，相關(guān)的治療策略已經(jīng)被逐步廣泛地運(yùn)用于臨床中。TF和uPAR各自作為凝血系統(tǒng)和纖溶系統(tǒng)的代表，在促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化形成的過(guò)程中有許多相似之處。它們的非凝血和纖溶作用，都是與細(xì)胞粘附、遷移以及增生相關(guān)，這些過(guò)程是與動(dòng)脈粥樣硬化形成相關(guān)的基本病理生理過(guò)程。本研究首次將TF和uPAR納入同一體系

2、，驗(yàn)證AngⅡ?qū)Χ弑磉_(dá)的影響，從新的角度說(shuō)明AngⅡ促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的機(jī)制。 目的: 1.觀察AngⅡ?qū)ρ芷交〖?xì)胞以及巨噬細(xì)胞TF和uPAR的表達(dá)的影響并探索其胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。 2.ARB和他汀類(lèi)藥物對(duì)上述誘導(dǎo)作用是否具有抑制作用，并從信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的角度分析抑制機(jī)理中相關(guān)的過(guò)程。 3.分析在動(dòng)脈粥樣硬化及其高危因素得患者中，TF和uPAR表達(dá)分布的特點(diǎn)，二者表達(dá)的關(guān)系。 方法: 1.采

3、用組織貼塊法培養(yǎng)人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞，進(jìn)行形態(tài)學(xué)和α-actin免疫組化鑒定；傳代培養(yǎng)THP-1細(xì)胞株并將其誘導(dǎo)為巨噬細(xì)胞。 2.采用免疫組化、細(xì)胞原位ELISA法檢測(cè)AngⅡ、替米沙坦、阿托伐他汀以及PKC、MAPKp38、ERK1/2三種信號(hào)途徑抑制物等藥物對(duì)TF、uPAR蛋白表達(dá)的影響；RT-PCR檢測(cè)對(duì)上述藥物TF、uPARmRNA表達(dá)的影響。 3.用ELISA檢測(cè)AngⅡ、替米沙坦、阿托伐他汀作用的細(xì)胞內(nèi)PKC、

4、IκB、NFκB含量。 4.發(fā)色底物法檢測(cè)患者血漿中游離TF的活性；用ELISA法檢測(cè)患者血漿中TF抗原量。 結(jié)果: 1.AngⅡ可以誘導(dǎo)人動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的TF抗原和mRNA表達(dá)增多，此誘導(dǎo)作用主要通過(guò)PKC途徑。替米沙坦和阿托伐他汀可以抑制該誘導(dǎo)作用，呈濃度依耐性，該抑制作用與降低胞內(nèi)PKC含量有關(guān)。 2.AngⅡ可以誘導(dǎo)人動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞uPAR抗原和mRNA的表達(dá)增強(qiáng)，此誘導(dǎo)作用主要通過(guò)ERK1/2途

5、徑。替米沙坦和阿托伐他汀可以抑制該誘導(dǎo)作用，呈濃度依耐性。 3.該巨噬細(xì)胞模型可以表達(dá)TF及uPAR，而且與ERK1/2信號(hào)途徑有關(guān)。但AngⅡ?qū)奘杉?xì)胞模型的刺激作用不明顯。 4.不同濃度的替米沙坦和阿托伐他汀可以抑制巨噬細(xì)胞模型TF的抗原表達(dá)，呈濃度依賴性。替米沙坦對(duì)uPAR的表達(dá)抑制不明顯，阿托伐他汀對(duì)uPAR的表達(dá)存在抑制作用，但與濃度沒(méi)有相關(guān)性。 5.患者血漿中TF的活性：DM、穩(wěn)定冠心病組＞代謝綜合征

6、組＞正常組和ACS組；血漿中TF抗原水平：ACS和代謝綜合征患者＞DM、穩(wěn)定冠心病組＞正常組。 結(jié)論: 1.體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)AngⅡ?qū)ρ芷交〖?xì)胞以及巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)作用，促進(jìn)TF及uPAR表達(dá)增高，從而在促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化形成，增加斑塊促凝性，削弱斑塊的穩(wěn)定性方面發(fā)揮作用。ARB和他汀類(lèi)藥物抑制AngⅡ誘導(dǎo)TF及uPAR表達(dá)，從而發(fā)揮它們?cè)谛难芟到y(tǒng)中的保護(hù)作用。 2.隨著動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)疾病的嚴(yán)重程度增加，TF抗原表