中國毛蝦（Acetes Chinensis）蛋白水解物中血管緊張素轉(zhuǎn)移酶抑制肽的研究.pdf

1、本文首先用胰蛋白酶、S5317酸性蛋白酶、黃海黃桿菌低溫堿性蛋白酶、3942中性蛋白酶、2709堿性蛋白酶五種酶酶解中國毛蝦蛋白，通過分析水解產(chǎn)物的可溶性氮、總氮、對血管緊張素轉(zhuǎn)移酶(ACE)的抑制活性，選取黃海黃桿菌低溫堿性酶和3942中性蛋白酶為制備ACE抑制肽的最佳水解酶。分別做黃海黃桿菌低溫堿性蛋白酶和3942中性蛋白酶酶解中國毛蝦蛋白的正交試驗，對水解條件進行優(yōu)化，得到ACE抑制活性最高的黃海黃桿菌低溫堿性蛋白酶酶解產(chǎn)物F4和

2、中性蛋白酶酶解產(chǎn)物F7。F4和F7組分的IC50值分別為5mg/mL和8.6mg/mL。F4和F7組分味道鮮美，能夠抵抗人體消化酶和ACE的水解，而保持較高的ACE抑制活性，可以滿足具有防治ACE引發(fā)的高血壓作用的功能食品的風(fēng)味及穩(wěn)定性要求。 考察體外具有ACE抑制活性的中國毛蝦蛋白酶解產(chǎn)物F4和F7對腎血管性高血壓大鼠的急性降血壓效果。兩腎—夾型建立腎血管性高血壓大鼠模型，測定其血壓和血漿中血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)的含量變化。

3、結(jié)果顯示F4及F7組分顯著地降低了腎血管性高血壓大鼠的動脈血壓。兩種組分也降低了高血壓大鼠血漿中的AngⅡ水平，表明抑制AngⅡ生成是中國毛蝦蛋白酶解產(chǎn)物急性降壓作用的降壓機制之一。 對具有體外和體內(nèi)活性的中國毛蝦蛋白酶解產(chǎn)物F4和F7進行分離純化，制備ACE抑制肽。用截留分子量1000和2000的透析袋透析F4后，發(fā)現(xiàn)F4組分中抑制ACE的肽主要為分子量小于1000的肽。用SephadexG-15和SP-SephadexC-5

4、0進一步對分子量小于1000的組分進行分離純化，取活性最好的峰，最后用反相高壓液相C18制備柱純化得到單一組分FIA。通過氨基酸組成和氨基酸結(jié)構(gòu)分析，確認(rèn)FIA為新型的ACE抑制肽Pro-Arg-Tyr。先后采用層析柱SephadexG-25、SP-SephadexC-50對F7組分進行分離，選取ACE抑制活性最高的峰進一步用反相高壓液相色譜C18制備柱進行純化得到單一組分FI，經(jīng)氨基酸組成和氨基酸結(jié)構(gòu)分析確定FI為新型的ACE抑制肽S

5、er-Pro。用Lineweaver-Burk法做ACE的酶反應(yīng)動力學(xué)曲線，考察Pro-Arg-Tyr和Ser-Pro抑制ACE的模式，結(jié)果顯示這兩種ACE抑制肽競爭性的抑制ACE與底物的結(jié)合。 本文也對中國毛蝦的發(fā)酵產(chǎn)品—蝦醬中的ACE抑制劑進行了研究。通過水提取、水提取后80％乙醇處理以及無水乙醇直接提取三種提取方式處理蝦醬分別得到樣品HWE、HWEE80和Eg0。結(jié)果顯示HWE、HWEE80和E80都具有較好的ACE抑制活