慢性胰腺炎模型大鼠胰腺結(jié)構(gòu)及功能變化的研究.pdf

1、研究背景: 慢性胰腺炎(chronic pancreatitis,CP)是較常見(jiàn)的胰腺疾病,以腹痛、糖尿病、脂肪瀉、胰腺纖維化為特征。但慢性胰腺炎的病因和發(fā)病機(jī)制未明。臨床試驗(yàn)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展相對(duì)緩慢,部分原因是因胰腺取材困難及缺乏可靠的動(dòng)物研究模型。 近年研究發(fā)現(xiàn)膽胰管內(nèi)逆行注射三硝基苯磺酸(trinitrobenenze sulfonicacid,TBNS)可成功模擬膽源性胰腺炎,造模3周后大鼠開(kāi)始出現(xiàn)胰腺組織纖維

2、化,是較為可靠的動(dòng)物模型。但在此動(dòng)物模型中,胰腺組織結(jié)構(gòu)及內(nèi)外分泌功能、疼痛的變化規(guī)律尚無(wú)研究,影響了對(duì)慢性胰腺炎病程變化、發(fā)病機(jī)制、干預(yù)因素切入時(shí)間點(diǎn)的確定等方面的進(jìn)一步研究。因此我們?cè)O(shè)計(jì)了本課題擬觀察慢性胰腺炎模型大鼠不同時(shí)間段胰腺組織纖維化、內(nèi)外分泌功能及熱痛閾的變化,探討其變化規(guī)律,并利用此模型為慢性胰腺炎相關(guān)研究提供基礎(chǔ)。 在慢性胰腺炎的幾大特征中,疼痛是最常見(jiàn)且治療頗棘手的難題。目前尚無(wú)有效的治療手段緩解慢性胰腺炎疼

3、痛。傳統(tǒng)理論認(rèn)為因胰管阻塞、胰腺纖維化引起的胰腺組織高壓或胰腺缺血是引起慢性胰腺炎疼痛的病因,但此觀點(diǎn)頗有爭(zhēng)議,多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)胰管壓力的高低與胰腺痛的嚴(yán)重度并無(wú)關(guān)聯(lián)。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)源性炎癥是慢性胰腺炎持續(xù)性疼痛的病因,而上述病理解剖因素可能僅為疼痛加重的誘因。 蛋白酶激活受體2(proteinase-activated receptor2,PAR-2)屬于蛋白酶激活受體超家族,是目前慢性疼痛及抗炎藥物治療的研發(fā)新熱點(diǎn),其廣泛分

4、布于消化道,并表達(dá)于胰腺的腺泡細(xì)胞、導(dǎo)管上皮細(xì)胞,被胰蛋白酶及肥大細(xì)胞類胰蛋白酶激活,參與調(diào)控胰腺炎癥、外分泌、傷害性感覺(jué)等多種生理功能,且胰腺痛的產(chǎn)生與PAR-2密切相關(guān)：胰管內(nèi)注射PAR-2激動(dòng)劑,可激活并致敏胰腺特異性傳入神經(jīng)元誘發(fā)大鼠的疼痛反應(yīng)。而PAR-2在慢性胰腺炎疼痛中的研究較少。我們?cè)诒狙芯恐杏^察了慢性胰腺炎模型大鼠背根神經(jīng)節(jié)中PAR-2的表達(dá)改變,并分析其表達(dá)與熱痛閾改變的相關(guān)性,初步探索此受體在慢性胰腺炎疼痛發(fā)生中的

5、作用,并為臨床治療提供新的靶點(diǎn)。 方法與結(jié)果: 1、大鼠慢性胰腺炎模型的制備 目的：建立慢性胰腺炎大鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?方法：膽胰管內(nèi)注射TNBS建立SD大鼠慢性胰腺炎模型,HE染色觀察胰腺組織病理學(xué)變化。Van Gieson染色觀察胰腺組織纖維化情況。 結(jié)果：第3周見(jiàn)胰腺組織出現(xiàn)局限性纖維化；第4周見(jiàn)胰管周圍、小葉間和小葉內(nèi)廣泛纖維化,伴炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),局灶腺體萎縮。Van Gieson染色分析結(jié)果示：

6、胰管周圍和小葉間膠原纖維陽(yáng)性染色所占面積：術(shù)后第3周(12±4)％、第4周(33±8)％；對(duì)照組第4周為(5±3)％,呈弱陽(yáng)性。 小結(jié)：胰管內(nèi)注射TNBS乙醇溶液制備慢性胰腺炎模型,具有可重復(fù)性,復(fù)制率高,病變發(fā)展過(guò)程與人類膽源性慢性胰腺炎相似。 2、慢性胰腺炎大鼠胰腺纖維化水平、內(nèi)外分泌功能變化 目的：研究大鼠慢性胰腺炎形成過(guò)程中內(nèi)外分泌功能變化規(guī)律。 方法：胰管內(nèi)注射TNBS造模后,分別檢測(cè)造模后第3

7、周及第4周大鼠空腹血糖,處死大鼠,取胰腺組織勻漿檢測(cè)胰腺淀粉酶、水解法檢測(cè)胰腺羥脯氨酸含量。 結(jié)果：(1)慢性胰腺炎模型大鼠血糖無(wú)變化,3周組與4周組之間(P=0.262)及與對(duì)照組相比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.205,P=0.262)。(2)慢性胰腺炎大鼠各組胰腺組織淀粉酶含量減低,與對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001),3周組與4周組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。(3)胰腺組織內(nèi)羥脯氨酸含量實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差

8、異(P=0.116,P=0.269),3周及4周實(shí)驗(yàn)組之間亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.543)。 小結(jié)：慢性胰腺炎模型大鼠的外分泌功能減退；內(nèi)分泌功能未見(jiàn)明顯改變；胰腺組織內(nèi)羥脯氨酸含量無(wú)變化。 3、慢性胰腺炎模型大鼠熱痛閾改變及背根神經(jīng)節(jié)PAR-2的表達(dá)變化 目的：觀察慢性胰腺炎模型大鼠熱痛閾變化情況及背根神經(jīng)節(jié)PAR-2的表達(dá)改變。 方法：熱痛刺激檢測(cè)大鼠腹壁熱痛閾變化,免疫熒光及qReal time P

9、CR檢測(cè)背根神經(jīng)節(jié)PAR-2表達(dá)。 結(jié)果：(1)造模后第3周、第4周大鼠腹部痛閾低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.018,P=0.001);3周組與4周組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.234)。(2)實(shí)驗(yàn)組大鼠背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元可見(jiàn)PAR-2表達(dá),主要表達(dá)在中小直徑的傷害性神經(jīng)元,PAR-2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)比值大于對(duì)照組(P<0.01)。慢性胰腺炎大鼠PAR-2 mRNA表達(dá)高于對(duì)照組(P=0.005)。(3)慢性胰腺炎大鼠背

10、根神經(jīng)中PAR-2表達(dá)與腹壁熱痛閾改變具有相關(guān)性。 小結(jié)：慢性胰腺炎大鼠腹壁熱痛閾降低,DRG中PAR-2表達(dá)增加,兩者具有相關(guān)性,PAR-2可能參與慢性胰腺炎疼痛的形成。 結(jié)論： 1、采用TNBS逆行膽胰管注射可成功建立慢性胰腺炎大鼠模型。 2、慢性胰腺炎大鼠胰腺外分泌功能減退；內(nèi)分泌功能未見(jiàn)明顯變化(至造模后第4周);胰腺組織自第3周開(kāi)始出現(xiàn)纖維化改變,第4周最為顯著,但胰腺組織羥脯氨酸含量未見(jiàn)變化。