IL-21對(duì)惡性淋巴瘤細(xì)胞增殖及凋亡影響的研究.pdf

1、淋巴瘤(lymphoma)是起源于淋巴結(jié)和淋巴組織的惡性腫瘤，其病因和發(fā)病機(jī)制不完全清楚，可能與免疫功能異常和細(xì)胞增殖及凋亡失衡有關(guān)。Livin是最近發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制蛋白家族(inhibitorofapoptosisproteins，IAPs)新成員，其高表達(dá)可以通過(guò)抑制半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspases)途徑，發(fā)揮抗細(xì)胞凋亡作用，而其低表達(dá)則可以促進(jìn)細(xì)胞的凋亡。半胱氨酸蛋白酶32(cysteineproteaseP32，CPP32

2、orCaspase-3)，是白介素-1β-轉(zhuǎn)化酶(interleukin-1β-convertingenzyme，Ice)家族的一員，在細(xì)胞凋亡過(guò)程中起著十分重要的作用，其高表達(dá)可引起細(xì)胞的凋亡。C-myc癌基因是一種核蛋白轉(zhuǎn)錄因子，在細(xì)胞周期以及細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程中有十分重要的調(diào)節(jié)作用，其高表達(dá)可抑制細(xì)胞的凋亡。白細(xì)胞介素-21(interleukin-21，IL-21)是與白細(xì)胞介素-2、白細(xì)胞介素-15同為細(xì)胞因子受體γc家族的單

3、鏈蛋白質(zhì)[1]，其通過(guò)結(jié)合特異性受體介導(dǎo)多種生物學(xué)效應(yīng)。有研究發(fā)現(xiàn)IL-21能誘導(dǎo)靜止或激活的原始B淋巴細(xì)胞凋亡，其機(jī)制可能是通過(guò)下調(diào)抗凋亡基因Bcl-2和Bcl-xl的表達(dá)，和激活Caspase-3來(lái)發(fā)揮促凋亡作用[2]?？梢?jiàn)，IL-21有望成為臨床抗腫瘤藥物。為此，我們觀察了IL-21對(duì)惡性淋巴瘤細(xì)胞株Raji細(xì)胞的增殖影響，并采用流式細(xì)胞儀(flowcytomeutry，F(xiàn)CM)分析和逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(reversetran

4、scription-polymerasechainreaction，RT-PCR)技術(shù)從細(xì)胞凋亡和凋亡相關(guān)基因表達(dá)等角度了解IL-21的抗腫瘤作用及其可能的作用機(jī)制，為進(jìn)一步探索惡性淋巴瘤的發(fā)病機(jī)制及治療提供理論依據(jù)。 [方法] 1.用噻唑蘭(Thiazolylblue，MTT)抑制試驗(yàn)，觀察IL-21對(duì)Raji細(xì)胞增殖的影響。 2.用FCM技術(shù)測(cè)定IL-21作用Raji細(xì)胞后細(xì)胞的凋亡率、周期分布的改變，觀察I

5、L-21對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。 3.采用RT-PCR技術(shù)測(cè)定C-myc、Livin及Caspase-3的mRNA水平，觀察IL-21對(duì)基因表達(dá)的影響。 [結(jié)果] 1.IL-21對(duì)Raji細(xì)胞的增殖作用：用MTT比色法檢測(cè)IL-21作用Raji細(xì)胞后結(jié)果顯示，IL-21在一定的藥物濃度和作用時(shí)間內(nèi)，呈時(shí)間和劑量依賴性地抑制Raji細(xì)胞的增殖。 2.IL-21對(duì)Raji細(xì)胞的凋亡影響：Raji細(xì)胞經(jīng)IL-21作用

6、24小時(shí)后，細(xì)胞凋亡率分別為7.26％，15.12％，22.57％，實(shí)驗(yàn)組的凋亡細(xì)胞百分比明顯高于對(duì)照組，兩者比較，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，IL-21可劑量依賴性地誘導(dǎo)Raji細(xì)胞凋亡。 3.RT-PCR檢測(cè)C-myc、Livin及Caspase-3mRNA表達(dá)水平，觀察不同濃度IL-21對(duì)基因表達(dá)的影響：不同濃度的的IL-21作用Raji細(xì)胞24時(shí)間后，IL-21可劑量依賴性地抑制C-myc和LivinmRNA表達(dá)及促進(jìn)Casp