MTB PPS過表達(dá)對(duì)MTB耐藥性產(chǎn)生的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討研究結(jié)核桿菌 Pup-蛋白酶體系統(tǒng)中 Pup、Dop、PafA和 Mpa基因的過表達(dá)對(duì)新疆地區(qū)流行耐藥結(jié)核桿菌臨床分離株耐藥性的影響。
　　方法：構(gòu)建及鑒定重組穿梭質(zhì)粒 pMV361/Pup、pMV361/Dop、pMV361/PafA和 pMV361/Mpa，利用電穿孔技術(shù)將重組穿梭質(zhì)粒pMV361/Pup、 pMV361/Dop、 pMV361/PafA和pMV361/Mpa分別電轉(zhuǎn)化至結(jié)核桿菌藥物敏感菌株、單純耐一

2、線抗結(jié)核藥物（異煙肼、利福平、鏈霉素、乙胺丁醇）的結(jié)核桿菌臨床分離株、耐多藥的結(jié)核桿菌臨床分離株，利用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR技術(shù)檢測(cè)及鑒定Pup-蛋白酶體系統(tǒng)中Pup、Dop、PafA和Mpa基因過表達(dá)的結(jié)核桿菌藥物敏感菌株、單純耐一線抗結(jié)核藥物（異煙肼、利福平、鏈霉素、乙胺丁醇）的結(jié)核桿菌菌株、耐多藥的結(jié)核桿菌菌株。利用顯色法測(cè)定 MIC值，檢測(cè)及分析 Pup-蛋白酶體系統(tǒng)中 Pup、Dop、PafA和 Mpa基因的過表達(dá)對(duì)新疆地區(qū)流行

3、的結(jié)核桿菌藥物敏感菌株、單純耐一線抗結(jié)核藥物（異煙肼、利福平、鏈霉素、乙胺丁醇）的結(jié)核桿菌臨床分離株、耐多藥的結(jié)核桿菌臨床分離株耐藥性的影響。
　　結(jié)果：利用顯色法測(cè)定 Pup、Dop、PafA和 Mpa基因過表達(dá)的各結(jié)核桿菌菌株的 MIC值，結(jié)果顯示：與原始菌株相比，①過表達(dá) Pup基因的耐多藥結(jié)核桿菌菌株和單純耐一線抗結(jié)核藥物的結(jié)核桿菌菌株 MIC值降低。②過表達(dá) Dop基因、過表達(dá) PafA基因和過表達(dá) Mpa基因的耐多藥結(jié)

4、核桿菌菌株和單純耐一線抗結(jié)核藥物的結(jié)核桿菌菌株 MIC值均升高。③過表達(dá) Pup基因、過表達(dá) Dop基因、過表達(dá) PafA基因和過表達(dá) Mpa基因的結(jié)核桿菌藥物敏感菌株仍對(duì)異煙肼和利福平敏感。④單純導(dǎo)入質(zhì)粒pMV361不會(huì)影響結(jié)核桿菌藥物敏感菌株、單純耐一線抗結(jié)核藥物（異煙肼、利福平、鏈霉素、乙胺丁醇）的結(jié)核桿菌菌株、耐多藥的結(jié)核桿菌菌株的MIC值。
　　結(jié)論：1、成功構(gòu)建了重組穿梭質(zhì)粒pMV361/Pup、 pMV361/Dop

5、、pMV361/PafA和pMV361/Mpa；2、成功構(gòu)建了結(jié)核桿菌 Pup-蛋白酶體系統(tǒng)中 Pup、Dop、PafA和 Mpa基因過表達(dá)的結(jié)核桿菌藥物敏感菌株、單純耐一線抗結(jié)核藥物（異煙肼、利福平、鏈霉素、乙胺丁醇）的結(jié)核桿菌菌株、耐多藥的結(jié)核桿菌菌株；3、MTB中 Pup基因過表達(dá)可以使耐多藥的結(jié)核桿菌菌株和單純耐一線抗結(jié)核藥物（異煙肼、利福平、鏈霉素、乙胺丁醇）的結(jié)核桿菌菌株的耐藥性減弱；4、MTB中 Dop、PafA和 Mpa