脂肪細胞共培養(yǎng)及白介素-6、抵抗素對HepG2細胞ABCA1表達的影響及可能機制探討.pdf

1、背景：
　　肥胖尤其是腹型肥胖是代謝綜合征的重要組成部分，并常伴有高密度脂蛋白膽固醇水平明顯減低。脂肪組織作為重要的內分泌器官在肥胖時分泌異常的脂肪因子如白細胞介素-6(IL-6)、抵抗素(Resistin)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)等。HDL主要在肝臟合成，其中三磷酸腺苷結合轉運子A1(ABCA1)和載脂蛋白A1(ApoA1)是其合成的關鍵蛋白。近來發(fā)現(xiàn)微小RNA-33(miR-33)位于膽固醇調節(jié)元件結合蛋(SREBP)

2、基因內含子中，可抑制ABCA1的表達，調節(jié)HDL的代謝。肥胖時紊亂的脂肪因子對肝臟HDL生成是否產生作用，并且此作用是否與miR-33相關暫不清楚。
　　目的：
　　建立脂肪細胞與肝細胞共培養(yǎng)模型，探討促分化成熟脂肪細胞及脂肪因子IL-6和Resistin干預分別對肝細胞表達ABCA1、ApoA1、miR-33a/b及SREBP2/1c等的影響。
　　方法：
　　培養(yǎng)小鼠3T3-L1前體脂肪細胞，誘導分化至成熟的

3、脂肪細胞;由行腹部外科手術患者的皮下脂肪組織中分離培養(yǎng)人脂肪源間充質干細胞(ADSCs)，誘導分化14天至成熟的脂肪細胞。將人肝癌細胞株HepG2細胞分別與未促分化小鼠3T3-L1及促分化小鼠成熟3T3-L1脂肪細胞共培養(yǎng)48小時;另外將HepG2細胞分別與未促分化的人ADSCs及促分化成熟的人ADSCs共培養(yǎng)48小時。將單獨培養(yǎng)的HepG2設為正常對照組。提取各組細胞的蛋白及總RNA，通過Western Blot方法檢測各組HepG2

4、細胞ABCA1蛋白表達量;實時熒光定量PCR(Real-time PCR)比較各組中miR-33a，miR-33b，SREBP-1c，SREBP-2，ABCA1，APOA1基因的相對表達量。
　　另外分別以脂肪因子IL-6和Resistin干預HepG2細胞，以不加干預的HepG2細胞為對照組，干預24小時后提取各組細胞的蛋白及總RNA，通過Western Blot方法檢測各組HepG2細胞ABCA1蛋白表達量;Real-time

5、 PCR比較各組中miR-33a，miR-33b，SREBP-1c，SREBP-2，ABCA1，APOA1基因的相對表達量。
　　結果：
　　1、與小鼠脂肪細胞或人脂肪細胞共培養(yǎng)均可降低HepG2細胞ABCA1蛋白及mRNA表達(P＜0.05);并且同時可使APOA1 mRNA表達下降(P＜0.05);
　　2、與對照組相比，10ng/ml IL-6干預后HepG2細胞ABCA1蛋白及mRNA表達明顯下降(P＜0.05

6、);而ApoA1mRNA表達無明顯變化(P＞0.05);
　　3、與對照組相比，50、100ng/ml Resistin干預后HepG2細胞ABCA1蛋白表達明顯下降(P＜0.05);25ng/ml Resistin干預后HepG2細胞ABCA1蛋白表達無明顯變化（P＞0.05）;但是各濃度Resistin干預對HepG2細胞ABCA1、ApoA1 mRNA表達均無明顯影響（P＞0.05）;
　　4、與小鼠脂肪細胞或人脂肪細

7、胞共培養(yǎng)可誘導HepG2細胞SREBP2/miR-33a及SREBP-1c/miR-33b表達下降(P＜0.05);
　　5、IL-6及Resistin干預后HepG2細胞SREBP2/miR-33a及SREBP-1c/miR-33b表達均無明顯變化（P＞0.05）。
　　結論：
　　應用通透性隔離腔(Transwell chamber)系統(tǒng)構建小鼠或人脂肪細胞與人肝癌細胞株HepG2細胞共培養(yǎng)的模型可以誘導HepG2