維生素K3聯(lián)用氯喹增強(qiáng)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡作用研究.pdf

1、一直以來(lái)通過(guò)增加腫瘤細(xì)胞的應(yīng)激水平是治療腫瘤的一個(gè)基本方法，之前的研究表明，氧化應(yīng)激能夠破壞線粒體的功能，從而促進(jìn)引起線粒體膜通透性增加，引發(fā)細(xì)胞色素 C的釋放，利用藥物誘導(dǎo)氧化應(yīng)激是治療腫瘤的一個(gè)有效的措施。維生素 K3能夠誘導(dǎo) ROS的生成，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡，被認(rèn)為是一種潛在的抗腫瘤藥物。最近的研究表明內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是另一種凋亡的來(lái)源，錯(cuò)誤折疊蛋白的堆積引發(fā)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激能夠最終誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡。ROS通過(guò)影響內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣平衡和對(duì)酶的氧化修飾能夠

2、引發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。
　　目的:用維生素K3作用于神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞，同時(shí)聯(lián)用自噬抑制劑氯喹來(lái)抑制錯(cuò)誤折疊蛋白的降解來(lái)加劇內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，達(dá)到更大程度殺傷神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的目的。
　　方法：采用神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251為研究對(duì)象，用維生素K3誘發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，同時(shí)利用氯喹抑制錯(cuò)誤折疊蛋白的降解來(lái)加劇內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。1.采用MTT觀察VK3作用下以及VK3和氯喹聯(lián)用下U251細(xì)胞的存活率；2.采用Western blot方法檢測(cè)單獨(dú)使用VK3以及V

3、K3聯(lián)用氯喹時(shí)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白GRP78的變化，以及泛素化蛋白，下游凋亡蛋白CHOP和caspase4/5的變化。
　　結(jié)果:1.維生素K3能夠通過(guò)增加泛素化蛋白顯著的增加內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白GRP78的表達(dá)并且具有時(shí)間依賴性，表明VK3能夠誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。2.在VK3聯(lián)用氯喹時(shí)，MTT結(jié)果表明細(xì)胞的生存率顯著降低，表明氯喹能夠增加VK3的殺傷腫瘤的作用。3. Western blot結(jié)果顯示，氯喹聯(lián)用VK3時(shí)泛素化蛋白的量增加，內(nèi)質(zhì)