心肌梗死所致心室組織間質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1的動(dòng)態(tài)變化.pdf

1、目的：應(yīng)用干細(xì)胞、細(xì)胞因子等技術(shù)修復(fù)心肌梗死后損傷是近年來心血管領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。這一治療療效的發(fā)揮首先依賴于有足夠數(shù)量的干細(xì)胞到達(dá)梗死及其周邊區(qū)域，并在這一區(qū)域停留足夠長的時(shí)間。做為促進(jìn)干細(xì)胞動(dòng)員和歸巢的關(guān)鍵細(xì)胞因子，間質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1(StromalcellDerivedFactor-1，SDF-1)通過與其受體CXCR4的相互作用，在心肌梗死后修復(fù)治療中發(fā)揮著重要的作用。然而，目前各文獻(xiàn)中關(guān)于心肌梗死后心室組織SDF-1含量變化情

2、況的報(bào)道并不一致，對于引起這一變化的機(jī)制更是所知甚少。本研究擬建立大鼠的心肌梗死動(dòng)物模型，分別檢測其梗死后不同時(shí)間點(diǎn)梗死區(qū)心室組織SDF-1的mRNA和蛋白表達(dá)變化情況，并與非梗死對照進(jìn)行比較，以期為深入了解心肌梗死后的病理生理變化提供參考依據(jù)，并初步探討引起這一變化的機(jī)制。 方法：選用10周齡雄性Wistar大鼠70只，行左冠狀動(dòng)脈前降支永久結(jié)扎手術(shù)建立大鼠心肌梗死模型，于術(shù)后1h、2h、6h、12h、1d、3d、7d、14d

3、、28d各分別處死大鼠(每個(gè)時(shí)點(diǎn)至少4只)，取其梗死區(qū)心肌組織進(jìn)行SDF-1的mRNA和蛋白水平檢測，對照組采用正常大鼠左心室游離壁組織。總RNA提取采用Trizol法；行瓊脂糖凝膠電泳檢驗(yàn)總RNA樣本的質(zhì)量；使用紫外光分光光度計(jì)測定總RNA樣本的OD260、OD280、OD310數(shù)值，用OD260和OD280的比值判斷總RNA樣本的純度，并根據(jù)OD260值計(jì)算總RNA樣本濃度；使用逆轉(zhuǎn)錄PCR法合成總RNA樣本的cDNA第一鏈：使用紫

4、外光分光光度計(jì)測定cDNA樣本的OD260、OD280、OD310數(shù)值，用OD260和OD280的比值判斷cDNA樣本的純度，并根據(jù)OD260值計(jì)算cDNA樣本濃度；先用普通PCR法初步判定引物及cDNA樣本的質(zhì)量，行瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行驗(yàn)證，成功后使用熒光定量PCR法對大鼠心室組織SDF-1的mRNA表達(dá)進(jìn)行相對定量。其余梗死區(qū)組織用蛋白裂解液裂解成勻漿，以二喹啉甲酸(BicinchoninicAciddisodium，BCA)法測定總

5、蛋白濃度后，采用WesternBlot法進(jìn)行SDF-1蛋白表達(dá)水平檢測。 結(jié)果：與對照組相比，大鼠心肌梗死后各個(gè)時(shí)間點(diǎn)心室組織SDF-1的mRNA表達(dá)水平均明顯降低，這一趨勢從梗死后1h一直持續(xù)到梗死后28d，且各時(shí)點(diǎn)之間無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。大鼠心肌梗死后1h～3d之間心室組織SDF-1的蛋白含量與對照組相比未見明顯差異，自第7d起梗死區(qū)心室組織SDF-1的蛋白含量開始升高，達(dá)到對照組的2.32倍(P<0.05)，至梗死后14d，

6、梗死區(qū)SDF-1的蛋白含量升高到對照組的3.19倍(P<0.05)，到梗死后28d，梗死區(qū)SDF-1的蛋白含量降至略高于對照組。 結(jié)論：大鼠心肌梗死后心室組織SDF-1的mRNA表達(dá)水平較梗死前呈明顯降低趨勢；而SDF-1的蛋白含量則于梗死后第7d起開始升高，直至梗死后28d仍略高于對照組。這提示心肌梗死后心室組織并不能合成足夠量的內(nèi)源性SDF-1從而動(dòng)員干細(xì)胞進(jìn)行自我修復(fù)，梗死后7d～28d期間梗死區(qū)SDF-1蛋白含量的升高可