心肌梗死所致心室組織間質(zhì)細胞衍生因子-1的動態(tài)變化.pdf

1、目的：應用干細胞、細胞因子等技術修復心肌梗死后損傷是近年來心血管領域的研究熱點。這一治療療效的發(fā)揮首先依賴于有足夠數(shù)量的干細胞到達梗死及其周邊區(qū)域，并在這一區(qū)域停留足夠長的時間。做為促進干細胞動員和歸巢的關鍵細胞因子，間質(zhì)細胞衍生因子-1(StromalcellDerivedFactor-1，SDF-1)通過與其受體CXCR4的相互作用，在心肌梗死后修復治療中發(fā)揮著重要的作用。然而，目前各文獻中關于心肌梗死后心室組織SDF-1含量變化情

2、況的報道并不一致，對于引起這一變化的機制更是所知甚少。本研究擬建立大鼠的心肌梗死動物模型，分別檢測其梗死后不同時間點梗死區(qū)心室組織SDF-1的mRNA和蛋白表達變化情況，并與非梗死對照進行比較，以期為深入了解心肌梗死后的病理生理變化提供參考依據(jù)，并初步探討引起這一變化的機制。 方法：選用10周齡雄性Wistar大鼠70只，行左冠狀動脈前降支永久結扎手術建立大鼠心肌梗死模型，于術后1h、2h、6h、12h、1d、3d、7d、14d

3、、28d各分別處死大鼠(每個時點至少4只)，取其梗死區(qū)心肌組織進行SDF-1的mRNA和蛋白水平檢測，對照組采用正常大鼠左心室游離壁組織。總RNA提取采用Trizol法；行瓊脂糖凝膠電泳檢驗總RNA樣本的質(zhì)量；使用紫外光分光光度計測定總RNA樣本的OD260、OD280、OD310數(shù)值，用OD260和OD280的比值判斷總RNA樣本的純度，并根據(jù)OD260值計算總RNA樣本濃度；使用逆轉(zhuǎn)錄PCR法合成總RNA樣本的cDNA第一鏈：使用紫

4、外光分光光度計測定cDNA樣本的OD260、OD280、OD310數(shù)值，用OD260和OD280的比值判斷cDNA樣本的純度，并根據(jù)OD260值計算cDNA樣本濃度；先用普通PCR法初步判定引物及cDNA樣本的質(zhì)量，行瓊脂糖凝膠電泳進行驗證，成功后使用熒光定量PCR法對大鼠心室組織SDF-1的mRNA表達進行相對定量。其余梗死區(qū)組織用蛋白裂解液裂解成勻漿，以二喹啉甲酸(BicinchoninicAciddisodium，BCA)法測定總

5、蛋白濃度后，采用WesternBlot法進行SDF-1蛋白表達水平檢測。 結果：與對照組相比，大鼠心肌梗死后各個時間點心室組織SDF-1的mRNA表達水平均明顯降低，這一趨勢從梗死后1h一直持續(xù)到梗死后28d，且各時點之間無明顯統(tǒng)計學差異。大鼠心肌梗死后1h～3d之間心室組織SDF-1的蛋白含量與對照組相比未見明顯差異，自第7d起梗死區(qū)心室組織SDF-1的蛋白含量開始升高，達到對照組的2.32倍(P<0.05)，至梗死后14d，

6、梗死區(qū)SDF-1的蛋白含量升高到對照組的3.19倍(P<0.05)，到梗死后28d，梗死區(qū)SDF-1的蛋白含量降至略高于對照組。 結論：大鼠心肌梗死后心室組織SDF-1的mRNA表達水平較梗死前呈明顯降低趨勢；而SDF-1的蛋白含量則于梗死后第7d起開始升高，直至梗死后28d仍略高于對照組。這提示心肌梗死后心室組織并不能合成足夠量的內(nèi)源性SDF-1從而動員干細胞進行自我修復，梗死后7d～28d期間梗死區(qū)SDF-1蛋白含量的升高可