胡桃楸根氯仿提取物及其有效成分的抗腫瘤活性研究.pdf

1、目的：探討胡桃楸根氯仿提取物對S180荷瘤小鼠體內(nèi)的腫瘤抑制作用以及從植物胡桃楸根氯仿提取物中分離出的單體化合物對腫瘤細胞抗增殖作用及機理的研究。
　　方法：1：按照標準方法給50只昆明種小鼠接種S180肉瘤后，給予胡桃楸根氯仿提取物10 d，觀察腫瘤質(zhì)量變化及胸腺（脾臟）指數(shù)，比色分析法檢測血清超氧化物歧化酶 superoxided ismutase（SOD）的活性及丙二醛 malondialdehyde（MDA）含量的變化，采

2、用酶標雙抗體夾心ELISA法檢測血清TNF-α、IL-2水平。2：采用MTT比色法觀察從胡桃楸根氯仿提取物中分離出的5種醌類化合物對人胃癌細胞（MGC-803）、人肺癌細胞（A549）、人白血病細胞（K562）、人宮頸腺癌細胞（HeLa）、人宮頸鱗癌細胞（CASKI）以及人宮頸鱗癌細胞（SiHa）6種腫瘤細胞株的增殖抑制作用，篩選出活性最好的單體化合物進行進一步的機理研究；我們采用流式細胞儀檢測早期細胞凋亡，結(jié)合倒置顯微鏡、HE染色、免

3、疫細胞化學染色方法檢測凋亡相關基因Bcl-2、Bax、p53的蛋白表達，觀察其誘導腫瘤細胞凋亡的作用。
　　結(jié)果：1：胡桃楸根氯仿提取物具有明顯的抑制腫瘤的作用，不同濃度的抑瘤率分別為48.37％、40.81%、36.52%，與模型對照組比較有顯著性差異（P<0.01）；實驗組的SOD活性高于模型對照組，而MDA含量低于模型對照組、TNF-α活性及IL-2誘生水平較模型對照組明顯增高（P<0.05）；2：MTT檢測結(jié)果顯示，2號單

4、體化合物（5-羥基-2-甲氧基-1,4-萘醌）具有較強的細胞毒性。不同濃度5-羥基-2-甲氧基-1,4-萘醌處理的實驗組人宮頸癌HeLa細胞的生存率呈濃度和時間依賴性降低，與對照組相比均有顯著性差異（P<0.001），其IC50值為3.75μmol/L；通過倒置顯微鏡觀察，對照組HeLa細胞增殖能力隨培養(yǎng)時間的延長明顯增強，而實驗組HeLa細胞增殖明顯受抑制。隨著時間的延長和藥物濃度的增加，細胞抑制效果越明顯，藥物對腫瘤細胞生長有量－效

5、、時－效關系；實驗組HeLa細胞HE染色染色質(zhì)濃縮，呈深染的新月體形；應用Annexin V/PI雙染色流式細胞儀檢測了早期HeLa細胞凋亡，未經(jīng)5-羥基-2-甲氧基-1,4-萘醌處理的正常HeLa細胞凋亡細胞極少，經(jīng)5-羥基-2-甲氧基-1,4-萘醌處理的細胞，凋亡細胞的百分比明顯高于正常對照組，其作用隨著劑量的增加和時間的延長而增強，具有量－效關系和時－效關系；免疫細胞化學染色結(jié)果顯示，5-羥基-2-甲氧基-1,4-萘醌可下調(diào)Bcl