營養(yǎng)狀況綜合評價工具研制及D-甲硫氨酸對胃癌細胞RUNX3表達影響的研究.pdf

1、目的：⑴對比研究不同營養(yǎng)評價方法(指標(biāo))在消化系統(tǒng)惡性腫瘤患者營養(yǎng)狀況和預(yù)后評判中的作用。⑵研究構(gòu)建營養(yǎng)狀況綜合評價的工具，以消化系統(tǒng)惡性腫瘤患者為研究對象，建立不同營養(yǎng)狀況的診斷界值。⑶通過體外細胞培養(yǎng)，觀察右旋甲硫氨酸(D-Met)替代左旋甲硫氨酸(L-Met)的培養(yǎng)環(huán)境對胃癌細胞RUNX3基因的表達、啟動區(qū)甲基化狀態(tài)逆轉(zhuǎn)及細胞增殖和凋亡的作用。 方法：①采用問卷評分法(SGA、MNA和NRS-2002)、人體測量(BMI、

2、TSF和MAMC)和實驗室檢測指標(biāo)(PA和ALB)等評判1003例消化系統(tǒng)惡性腫瘤患者的營養(yǎng)狀況。②采用上述8種評價方法(指標(biāo))評價532例行根治性手術(shù)的消化系統(tǒng)惡性腫瘤患者的術(shù)前營養(yǎng)狀況，并跟蹤其預(yù)后。③用AHP法自行構(gòu)建營養(yǎng)狀況綜合評價工具，并以888例消化系統(tǒng)惡性腫瘤患者為研究對象，用ROC曲線探尋和建立該新建工具用于判斷不同營養(yǎng)狀況的診斷界值。④用RT-PCR和Real-time PCR檢測9株人胃癌細胞和11例胃癌組織標(biāo)本和3

3、3例正常胃黏膜組織中RUNX3基因的表達，用MSP檢測9株人胃癌細胞的RUNX3啟動區(qū)4個位點的甲基化狀態(tài)。⑤觀察5-Aza-CdR和不同培養(yǎng)環(huán)境(RPMI-1640、D-Met，L-Met和Hcy+Met-)對SGC-7901和KATO-III的RUNX3基因表達、啟動區(qū)甲基化狀態(tài)、及細胞增殖和凋亡的影響。 結(jié)果：⑴不同評價方法(指標(biāo))對同一批消化系統(tǒng)惡性腫瘤患者評判所得的營養(yǎng)不良發(fā)生率從11.86％～67.20％不等：其中以

4、MNA法最高(67.20％)，BMI最低(11.86％)。經(jīng)多元回歸分析發(fā)現(xiàn)體重下降程度是影響3種問卷評分法評判結(jié)果的主要因素。⑵SGA、MNA. NRS-2002、PA、ALB、BMI和TSF間的兩兩評判結(jié)果間均存有一定的相關(guān)性(P<0.05)和一致性(P<0.05)，但相關(guān)性和一致性并不好。⑶經(jīng)血清白蛋白水平評判為營養(yǎng)不良組患者的并發(fā)癥發(fā)生率(26.71％)明顯高于營養(yǎng)正常組(18.11％)(P<0.05)，且血清白蛋白水平是預(yù)測本

5、組患者并發(fā)癥的獨立因素。⑷新構(gòu)建的營養(yǎng)狀況綜合評價工具包括11個評價指標(biāo)，并對各指標(biāo)設(shè)定不同的權(quán)重。工具的評價總得分為30分。對存在營養(yǎng)不良風(fēng)險、營養(yǎng)不良和需要營養(yǎng)支持的診斷界值分別為27.15分、23.95分和14.95分。⑸RUNX3表達程度由高到低依次為正常胃黏膜組織、癌旁組織和腫瘤組織；在9株胃癌細胞株中RUNX3均為低表達。⑹RUNX3表達相對較高的細胞株(SNU-16、SGC-7901、BGC-823)啟動區(qū)的4個檢測位點主

6、要呈未甲基化或部分甲基化；RUNX3表達相對中等的細胞株(AGS、N87、MKN-28)的4個檢測位點主要呈完全甲基化、部分甲基化或未甲基化；RUNX3表達較低的2個細胞株(SNU-1、KATO-III)的4個檢測位點呈現(xiàn)完全甲基化。⑺在1μM5-Aza-CdR處理環(huán)境中，KATO-III的RUNX3表達增加，且其啟動區(qū)的4個檢測位點中有3個位點甲基化狀態(tài)部分逆轉(zhuǎn)；且其與RPMI-1640培養(yǎng)環(huán)境相比，細胞增殖受抑制(P<0.05)，細

7、胞凋亡明顯增加。⑻KATO-III在D-Met培養(yǎng)環(huán)境中RUNX3表達增加；細胞增殖受抑(P<0.05)和凋亡增加；且有1個檢測位點甲基化水平下降。 結(jié)論：①不同評價方法(指標(biāo))對同一批消化系統(tǒng)惡性腫瘤患者營養(yǎng)狀況的評判結(jié)果間存在較大差異，且評判結(jié)果間的相關(guān)性和一致性并不好。②不同營養(yǎng)評價方法(指標(biāo))在消化系統(tǒng)惡性腫瘤患者預(yù)后評判中的作用各異，血清白蛋白水平是影響本組患者預(yù)后的獨立因素。③用AHP構(gòu)建的營養(yǎng)狀況綜合評價的工具，兼

8、顧了不同指標(biāo)間的權(quán)重，完成了定性指標(biāo)的定量化轉(zhuǎn)換，是將數(shù)學(xué)理論應(yīng)用到臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的一次全新嘗試。④利用ROC曲線建立的營養(yǎng)狀況綜合評價的工具的診斷界值能有助于區(qū)分消化系統(tǒng)惡性腫瘤患者的不同營養(yǎng)狀況。該評價工具的準(zhǔn)確度為86.75％；敏感度為85.08％；特異度為87.07％。⑤胃癌中RUNX3的表達下調(diào)與啟動區(qū)甲基化修飾有一定的關(guān)系，D-Met和5-Aza-CdR可部分逆轉(zhuǎn)RUNX3啟動區(qū)的高甲基化狀態(tài)、提高RUNX3mRNA的表達、降