金黃色葡萄球菌α-毒素對小鼠肺AQP1表達(dá)的影響.pdf

1、前言：水通道蛋白(Aquaporin，AQP)是一組水選擇通道的分子家族，對生命體內(nèi)水的轉(zhuǎn)運(yùn)提供了快速的通道。在哺乳動物，水通道存在于許多組織和器官如：腦、腎、肺等。已知肺組織中有多種水通道蛋白表達(dá)，其中主要分布于肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞(LMEC)的AQP1對維持肺水平衡發(fā)揮著重要作用。 目的：本實(shí)驗(yàn)擬通過觀察金黃色葡萄球菌α-毒素(α-Toxin)對小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞AQP1表達(dá)的影響，為進(jìn)一步研究肺水代謝異常的機(jī)制提供理論基礎(chǔ)及

2、實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 材料和方法取20只雄性Balb/c小鼠，隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組和對照組。實(shí)驗(yàn)組給α-Toxin刺激因素后按6h、10h、24h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)分為三組：6h為α-Toxin6h組、10h為α-Toxin10h組以及24h為α-Toxin24h組。處死小鼠取材。對照組則給相等量NS后于10h處死取材。開胸灌流肺臟盡量把肺血沖凈后取肺：左肺制成蠟塊，用于HE染色及免疫組化染色。免疫組化染色采用SP法，按說明書操作。通過圖像分析系統(tǒng)

3、進(jìn)行圖像采集、光密度掃描半定量分析，檢測AQP1在肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的表達(dá)。統(tǒng)計(jì)方法采用SPSSV11軟件包，根據(jù)數(shù)據(jù)特征進(jìn)行多樣本的方差分析及方差分析的兩兩比較(LSD法)，所有結(jié)果采取p＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果病理學(xué)改變α-Toxin各組肺泡間隔有不同程度的增寬，炎細(xì)胞浸潤，水腫，肺泡結(jié)構(gòu)破壞。以α-Toxin10h組最為明顯。免疫組化染色AQP1主要存在于肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞。AQP1的表達(dá)在α-Toxin各組均有不同程

4、度減少，以α-Toxin10h組最為明顯。經(jīng)方差分析p＜0.05,有顯著性差異。組間兩兩比較α-Toxin6h組與α-Toxin24h組p＞0.05無顯著性差異，其余各組比較p＜0.05有顯著性差異。 討論早期理論認(rèn)為調(diào)節(jié)組織內(nèi)水代謝的途徑是透過血管內(nèi)皮或組織上皮的細(xì)胞連接間隙進(jìn)行單純擴(kuò)散。而近年來水通道蛋白的發(fā)現(xiàn)使人們對水代謝機(jī)制的認(rèn)識產(chǎn)生了革命性的變化。目前已知肺組織中存在6種水通道蛋白，其中AQP1主要分布于肺微血管內(nèi)皮細(xì)

5、胞(LMEC)，在調(diào)節(jié)水代謝中發(fā)揮重要作用。有研究表明：AQP1敲除的小鼠肺泡一毛細(xì)血管間水的通透性較野生型降低了10倍。而且在新生小鼠肺臟內(nèi)液體大量吸收的關(guān)鍵時(shí)期AQP1表達(dá)大量增加。肺微血管是構(gòu)成血?dú)馄琳系闹匾Y(jié)構(gòu)。在各種炎癥損傷等引起的病理過程中LMEC通透性增加是發(fā)病的中心環(huán)節(jié)。本研究結(jié)果顯示水通透性強(qiáng)弱與細(xì)胞膜上AQP1密度成正相關(guān)。α-Toxin刺激后的LEMC的AQP1表達(dá)下降明顯，從而導(dǎo)致水代謝障礙。隨著損傷的減弱，AQ