堿基切除修復(fù)基因多態(tài)性及其表達(dá)與非吸煙女性肺腺癌發(fā)生危險(xiǎn)度的關(guān)系研究.pdf

1、目的：
　　肺癌是全球癌癥發(fā)病率和死亡率增長最快的惡性腫瘤之一，根據(jù)世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究中心(IARC/WHO)最新估計(jì)，2002年全球肺癌的男性發(fā)病率為35.5/10萬，死亡率為31.2/10萬;女性發(fā)病率為12.1/10萬，死亡率為10.3/10萬。我國90年代的惡性腫瘤抽樣調(diào)查顯示，肺癌的粗死亡率是17.54/10萬，其中男性為24.3/10萬，女性為10.66/10萬。主動(dòng)吸煙為肺癌的主要病因已經(jīng)得到證實(shí)，然而據(jù)統(tǒng)計(jì)，

2、全球仍有15％的男性肺癌和53％的女性肺癌不是由吸煙造成的，全世界范圍內(nèi)每年超過30萬肺癌死亡病例的產(chǎn)生與吸煙無關(guān)，非吸煙肺癌占所有肺癌病例總數(shù)的25％。我國城市女性肺癌的發(fā)病率和死亡率在世界上屆最高之列。在過去的30年中，肺癌的發(fā)病率和死亡率在吸煙率低的婦女中增加很快，而肺腺癌是女性肺癌最常見的組織學(xué)類型。所以本研究旨在探討非吸煙女性肺腺癌發(fā)生發(fā)展的影響因素。
　　肺癌是一種多因素的疾病，是環(huán)境暴露和遺傳因素綜合作用的結(jié)果。近年

3、來對(duì)肺癌風(fēng)險(xiǎn)基因關(guān)聯(lián)的研究都集中在單核苷酸多態(tài)性(SNPs)對(duì)候選基因的影響，特別是DNA修復(fù)基因被越來越多的研究。DNA修復(fù)系統(tǒng)在維持基因組的完整性起著重要的作用，保護(hù)人類基因組由于環(huán)境致癌物引起的損害。研究表明，DNA修復(fù)基因的遺傳特異性影響DNA修復(fù)能力，進(jìn)而認(rèn)為與肺癌的發(fā)生相關(guān)。其中堿基切除修復(fù)(BER)基因主要參與修復(fù)內(nèi)源性烷化劑和外源性致癌劑如亞硝氨引起的DNA堿基的烷化以及細(xì)胞內(nèi)自發(fā)的和由于電離輻射及紫外線輻射引起的DNA

4、堿基的氧化。人8-羥基鳥嘌呤DNA糖苷酶1(hOGG1)，脫嘌呤和脫嘧啶核酸內(nèi)切酶1(APE1)和二磷酸腺苷核糖轉(zhuǎn)移酶(ADPRT)基因在BER途徑中發(fā)揮重要的作用。DNA修復(fù)基因單核苷酸多態(tài)性作為個(gè)體DNA損傷修復(fù)能力差異的分子遺傳學(xué)基礎(chǔ)，可能是影響肺癌發(fā)生及發(fā)展的重要遺傳因素。所以本研究第一部分采用病例對(duì)照研究方法，采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)方法，以探討hOGG1，APE1和ADPRT基因多態(tài)性與非

5、吸煙女性肺腺癌危險(xiǎn)度的關(guān)系，并探討環(huán)境暴露因素與基因多態(tài)性交互作用對(duì)患癌危險(xiǎn)的影響。本研究第二部分選取了上述3個(gè)BER基因，采用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)從轉(zhuǎn)錄水平檢測(cè)了其mRNA在肺腺癌組織中和癌旁組織中的表達(dá)及與SNP的相關(guān)性研究，以期揭示肺癌發(fā)生的分子機(jī)制及其與臨床特征的關(guān)系及基因SNP對(duì)mRNA表達(dá)的影響。本研究第三部分采用免疫組織化學(xué)法對(duì)90例肺腺癌組織及51例癌旁組織中hOGG1，APE1和ADPRT蛋白的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)及與SNP的相

6、關(guān)性研究，結(jié)合臨床病理特征進(jìn)行分析，探討其在肺腺癌發(fā)生發(fā)展中所起的作用及基因SNP對(duì)蛋白表達(dá)的影響，以期揭示肺癌發(fā)生的分子機(jī)制及其與臨床特征的關(guān)系。
　　方法：
　　本研究所有對(duì)象選自于2002年1月至2008年12月在中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院和沈陽北方醫(yī)院經(jīng)病理組織學(xué)確診的肺腺癌患者，患者為非吸煙女性，均簽署知情同意書，提供標(biāo)本的同時(shí)，完成流行病學(xué)調(diào)查。第一部分采用病例對(duì)照研究方法，對(duì)象選自于2002年1月至2008年12

7、月在中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院和沈陽北方醫(yī)院經(jīng)病理組織學(xué)確診的肺腺癌患者410例，對(duì)照組隨機(jī)選自同一時(shí)期、同一醫(yī)院的其他肺部疾病患者410例，按年齡（±5）與病例頻數(shù)匹配。第二部分mRNA表達(dá)研究包括肺腺癌病例90人，收集51例與癌組織不在同一肺葉或同一肺葉內(nèi)遠(yuǎn)離肺癌病灶至少5cm組織作為對(duì)照。篼三部分研究對(duì)象同第二部分。采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)方法進(jìn)行hOGG1基因Ser326Cys，APE1基因As

8、p148Glu和ADPRT基因Va1762Ala多態(tài)檢測(cè)并隨機(jī)選取部分樣本進(jìn)行DNA測(cè)序;實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)hOGG1，APE1和ADPRT基因mRNA的表達(dá);免疫組化檢測(cè)hOGG1，APE1和ADPRT蛋白的表達(dá)。
　　使用統(tǒng)一編制的女性健康調(diào)查表，由兩名經(jīng)過培訓(xùn)的調(diào)查員對(duì)病例及對(duì)照進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查。調(diào)查內(nèi)容包括:一般狀況、腫瘤家族史、烹飪油煙暴露史、煤煙暴露史和被動(dòng)吸煙史等。所有調(diào)查資料經(jīng)過反復(fù)檢查、核對(duì)和編碼后，建立病例和對(duì)

9、照的信息數(shù)據(jù)庫。
　　所用統(tǒng)計(jì)軟件為SPSS13.0版本，計(jì)數(shù)資料采用X2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)。所有的統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)均為雙側(cè)概率檢驗(yàn)，以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異。非條件logistic回歸通過優(yōu)勢(shì)比(ORs)及其95％的置信區(qū)間(CIs)等參數(shù)分析基因位點(diǎn)與肺癌易感的相關(guān)性;采用logistic回歸評(píng)估基因與基因及基因與環(huán)境的相互作用。
　　結(jié)果：
　　本研究第一部分探討hOGG1，APE1和ADPRT基因多態(tài)性

10、與非吸煙女性肺腺癌危險(xiǎn)度的關(guān)系，并研究環(huán)境暴露因素與基因多態(tài)交互作用對(duì)患肺腺癌危險(xiǎn)的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)攜帶hOGG1 Cys/Cys基因型的個(gè)體與攜帶hOGG1 Ser/Ser者比較，患肺腺癌風(fēng)險(xiǎn)增加了1.54倍(校正后OR=1.54，95％ CI:1.01-2.36，P=0.045)。而APE1 Asp148Glu和ADPRT Va1762Ala基因多態(tài)性與非吸煙女性肺腺癌的患病風(fēng)險(xiǎn)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);多態(tài)性聯(lián)合作用與肺腺癌患病

11、危險(xiǎn)度的關(guān)系分析中結(jié)果發(fā)現(xiàn)攜帶大于1個(gè)hOGG1326Cys/Cys，APE1148Glu/Glu和ADPRT762Ala/Ala純合子等位基因的個(gè)體罹患肺腺癌的危險(xiǎn)顯著增高(OR=1.89;95％ CI:1.24-2.88;P=0.003)，而攜帶一個(gè)純合子等位基因的個(gè)體與非吸煙女性肺腺癌的患病風(fēng)險(xiǎn)無顯著性相關(guān)?；蚺c環(huán)境交互作用分析中結(jié)果顯示攜帶Ser/Cys基因型且有油煙暴露者患肺腺癌的風(fēng)險(xiǎn)有增加，校正的OR=1.37(95％ C

12、I=0.77-2.44; P=0.279)，攜帶Cys/Cys基因型且有油煙暴露者患肺腺癌的風(fēng)險(xiǎn)增加了約2倍(OR=2.79，95％CI=1.50-5.18; P=0.001)。
　　本研究第二部分是從轉(zhuǎn)錄水平檢測(cè)hOGG1，APE1和ADPRT mRNA表達(dá)與非吸煙女性肺腺癌及其與SNP的關(guān)系。結(jié)果顯示hOGG1，APE1和ADPRT mRNA在肺腺癌中表達(dá)均顯著高于癌旁對(duì)照組，APE1 mRNA表達(dá)與腫瘤臨床分期相關(guān)(P＜0.

13、05)，而與患者年齡、原發(fā)腫瘤大小、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移等均無顯著關(guān)系;hOGG1和ADPRT mRNA表達(dá)與患者年齡、原發(fā)腫瘤大小、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移、腫瘤臨床分期等均無顯著關(guān)系。hOGG1，APE1和ADPRT基因多態(tài)對(duì)其mRNA的表達(dá)沒有影響，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　本研究第三部分探討hOGG1，APE1和ADPRT蛋白的表達(dá)與非吸煙女性肺腺癌及其與SNP的關(guān)系。結(jié)果顯示肺腺癌中hOGG1，APE1和ADPRT蛋白表達(dá)

14、均高于對(duì)照組，APE1蛋白表達(dá)與肺癌的臨床分期相關(guān)(P＜0.05)，在Ⅲ+Ⅳ期的表達(dá)水平顯著高于Ⅰ+Ⅱ期，而與患者年齡、腫瘤大小和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無密切關(guān)系。hOGG1和ADPRT蛋白表達(dá)與患者年齡、腫瘤大小、腫瘤臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等均無顯著關(guān)系。hOGG1，APE1和ADPRT基因多態(tài)對(duì)其蛋白的表達(dá)沒有影響，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。hOGG1，APE1和ADPRT蛋白高表達(dá)組其mRNA高表達(dá)，hOGG1，APE1和ADPRT m

15、RNA表達(dá)與其蛋白表達(dá)相關(guān)(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、hOGG1基因Cys/Cys單核苷酸多態(tài)可能是中國非吸煙女性肺腺癌的遺傳易感因素;hOGG1326Cys，APE1148Glu和ADPRT762Ala基因多態(tài)聯(lián)合作用使患肺腺癌的風(fēng)險(xiǎn)顯著增高;烹飪油煙暴露和hOGG1 Cys/Cys基因型在非吸煙女性肺腺癌中具有顯著的基因環(huán)境交互作用。
　　2、hOGG1，APE1和ADPRT mRNA表達(dá)與非吸煙女性肺