阿托伐他汀抑制腹主動脈瘤形成的實驗研究.pdf

1、1.背景和意義 動脈粥樣硬化是腹主動脈瘤發(fā)生的獨立的危險因子，炎癥及細胞外基質(zhì)的重構(gòu)在腹主動脈瘤的發(fā)病中起著至關(guān)重要的作用。各種炎性細胞的浸潤促進基質(zhì)金屬酶的分泌，引起腹主動脈彈力纖維及膠原纖維的損傷，最終導(dǎo)致腹主動脈瘤的形成和發(fā)展。核轉(zhuǎn)錄因子-кB(nuclearfactor-кB，NF-кB)活化具有啟動、調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄作用，是促炎癥基因表達的樞紐之一?；罨腘F-кB可能是腹主動脈瘤擴張的重要調(diào)節(jié)因子，但其在腹主動脈瘤早期形

2、成中的作用目前未見報導(dǎo)。過氧化物酶體增殖物活化型受體γ(peroxisomeproliferators-activatedreceptors，PPARγ)激動劑可抑制單核/巨噬細胞基質(zhì)金屬酶(matrixmetalloproteinases，MMPs)的釋放，對血管的炎癥反應(yīng)具有重要的調(diào)節(jié)作用，因而對動脈粥樣硬化及腹主動脈瘤的形成可能有抑制作用。但目前PPARγ對腹主動脈瘤早期形成中的作用尚不清楚。 他汀類藥物是治療和預(yù)防動脈粥

3、樣硬化最有效的藥物之一，除能調(diào)節(jié)血脂外，還具有重要的抗炎作用，臨床觀察長程使用他汀類藥物可降低腹主動脈瘤術(shù)后患者的死亡率。這些研究提示他汀類藥物對動脈瘤可能有好處，但其療效和可能機制仍需要進一步明確。 本研究目的：探索建立與人腹主動脈瘤形態(tài)和組織學(xué)相似的動物模型的建模方法；驗證炎癥及基質(zhì)金屬酶在腹主動脈瘤形成中的作用；觀察核轉(zhuǎn)錄因子NF-кB、PPARγ在實驗性腹主動脈瘤中的表達，從而在核轉(zhuǎn)錄水平對腹主動脈瘤的發(fā)病機制進行初步研

4、究；觀察阿托伐他汀對實驗性AAA形成和腹主動脈瘤壁組織中基質(zhì)金屬酶-9(matrixmetalloproteinases-9，MMP-9)及NF-кB、PPARγ的影響，探索其可能的作用機制。為臨床運用他汀類藥物干預(yù)小的AAA患者及AAA手術(shù)后患者的用藥尋找新的依據(jù)。 2.研究方法和內(nèi)容 本研究共分二個部分。第一部分改進建立腹主動脈瘤模型的方法并進行形態(tài)學(xué)研究：以大鼠腎下腹主動脈加壓灌注彈力蛋白酶建立AAA動物模型為基礎(chǔ)

5、，稍加改進建立簡便、迅速、穩(wěn)定性及成功率高的AAA大鼠模型。第二部分觀察MMP-9、PPARγ、NF-кB在大鼠腹主動脈瘤模型中的表達：造模后14天收取標(biāo)本，切片行病理形態(tài)學(xué)、彈力蛋白和膠原染色的組織學(xué)觀察；運用免疫組化方法及RT-PCR的方法觀察MMP-9和NF-кB、PPARγ在腹主動脈瘤組織中的蛋白及mRNA表達。同時觀察阿托伐他汀在抑制腹主動脈瘤形成中的作用及可能機制：實驗組造模前一周開始阿托伐他汀皮下注射，造模后繼續(xù)用藥二周；

6、對照組造模前一周開始生理鹽水肌注至造模后二周。取標(biāo)本切片行病理形態(tài)學(xué)及彈力纖維和膠原纖維染色的組織學(xué)觀察，同時觀察阿托伐他汀對腹主動脈中MMP-9和NF-кB、PPARγ蛋白及mRNA表達的影響。應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，各組數(shù)據(jù)描述均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((-x)±s)，兩組間數(shù)值的比較采用獨立樣本t檢驗，率的比較用確切概率x2檢驗。雙變量相關(guān)分析用Pearson相關(guān)分析法。 3.研究結(jié)果及結(jié)論 3.1研

7、究結(jié)果：(1)腹主動脈瘤模型的建立：采用腹正中一次性切口、髂總動脈一次性進入套管針的方法減少手術(shù)步驟，同時將灌注時間從2小時縮短至30分鐘以縮短手術(shù)和麻醉時間，明顯提高實驗動物的生存率，降低了實驗動物死亡率(實驗組動物存活率為86％，對照組存活率約為60％，P＜0.05)，且兩種方法對腹主動脈瘤形成率無明顯影響(實驗組為92％，對照組為88％，P＞0.1)。 (2)阿托伐他汀對腹主動脈瘤形成的作用：術(shù)后第14天，對照組大鼠腹主動

8、脈直徑擴張率為168％-200％、腹主動脈瘤形成率為90％；實驗組大鼠腹主動脈直徑擴張率為20％-103％，腹主動脈瘤形成率為20％。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)檢驗兩組大鼠腹主動脈擴張率及腹主動脈瘤形成率之間差異均有顯著意義(P＜0.05)。(3)MMP-9、PPARγ、NF-кB在大鼠腹主動脈瘤模型中的表達：病理切片檢查示對照組動脈中膜彈力組織嚴(yán)重受損，外膜炎性細胞浸潤明顯；實驗組動脈組織見中外膜稍增厚，彈力纖維未見明顯斷裂消失等受損表現(xiàn)，未見明顯炎性

9、細胞浸潤。對照組腹主動脈MMP-9、NF-кB表達升高，PPARγ低水平表達。實驗組腹主動脈MMP-9、NF-кB表達明顯降低、PPARγ表達明顯增強(P＜0.05)。Pearson相關(guān)分析法分析MMP-9mRNA的變化與NF-кBmRNA的變化有正相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)R=0.748，P=0.005)；PPARγmRNA的變化與NF-кBmRNA的變化有負相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)R=-0.691，P=0.013)。兩組大鼠血清血脂水平差異無顯著

10、意義(P＞0.1)。 3.2研究結(jié)論：(1)在彈力蛋白酶誘導(dǎo)的大鼠腹主動脈瘤模型中，采用腹部正中一次切口，從髂總動脈進套管針，在灌注總量不變的前提下，將灌注時間縮短至30分鐘，可簡化手術(shù)步驟，降低動物死亡率，不影響腹主動脈瘤的形成。(2)在腹主動脈瘤壁組織中MMP-9、NF-кB表達增強，PPARγ呈低水平表達。(3)在血脂無明顯降低的情況下，阿托伐他汀明顯降低腹主動脈的擴張率及動脈瘤的發(fā)生率，減少炎癥細胞浸潤，其機制可能與刺激