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文檔簡介
1、背景 動脈粥樣硬化(Atherosclerosis,AS)是大多數(shù)心腦血管疾病的重要病理基礎,會造成血管舒縮性降低、管腔變窄甚至阻塞以及血栓形成等病理改變,嚴重影響心臟及整個循環(huán)系統(tǒng)的功能,導致各種急性心血管事件的發(fā)生。因此,AS的發(fā)生機制以及藥物對AS的預防和治療作用研究成為國內外研究的熱點。以往很長時間,AS被認為是一種老年性、退行性病變。但近年的研究發(fā)現(xiàn)AS是由于各種因素造成血管內皮功能和結構的損傷,多種細胞因子介導,血管
2、內皮細胞、平滑肌細胞和白細胞等共同參與的慢性炎癥過程。葡萄籽原花青素(grapeseedproanthocyanidinextract,GSPE)是從葡萄籽中提取出來的一類多酚化合物,它具有極強的抗氧化等活性。通心絡是由人參、水蛭、全蝎、土鱉蟲、蜈蚣、赤芍、冰片等多種純天然中藥精制而成的中藥復方制劑,具有活血通絡、益氣補心的作用。我們的研究通過對動物飼喂高膽固醇飲食,觀察GSPE、通心絡以及GSPE聯(lián)合通心絡對AS的預防性干預作用,旨在
3、探討GSPE和通心絡的抗AS的機制,以及兩種藥物聯(lián)合應用對AS的影響,為臨床的使用提供實驗依據(jù)。 目的 通過飼喂高膽固醇建立兔AS動物模型,觀察GSPE、通心絡及GSPE聯(lián)合通心絡對AS的預防性干預作用,并從以下方面對其機制進行探討。 (1)觀察GSPE、通心絡及GSPE聯(lián)合通心絡對AS兔血脂的影響; (2)觀察GSPE、通心絡及GSPE聯(lián)合通心絡對AS兔丙二醛(malondialdehyde,MDA)的
4、影響,研究其清除自由基、抗脂質過氧化作用; (3)觀察GSPE、通心絡及GSPE聯(lián)合通心絡對AS兔血清一氧化氮(nitricoxide,NO)的影響,研究其內皮保護作用; (4)觀察GSPE、通心絡及GSPE聯(lián)合通心絡對AS兔血清血管細胞黏附分子(vascularcelladhensionmolecule,VCAM-1)的影響,研究其抗內皮黏附作用; (5)觀察GSPE、通心絡及GSPE聯(lián)合通心絡對AS兔血清白介
5、素6(interleukin6,IL-6)的影響,研究其抗內皮炎癥作用; (6)對不同觀察組的兔的主動脈、心、腦組織進行大體、電鏡及免疫組織化學指標的觀察和比較,證實GSPE、通心絡及GSPE聯(lián)合通心絡的抗AS作用; (7)研究GSPE與通心絡兩種藥物對AS的預防性干預作用是否存在協(xié)同效應。 方法 (1)建立AS動物模型并進行GSPE、通心絡及GSPE聯(lián)合通心絡的預防性干預:選購雄性新西蘭大白兔24只,分
6、籠喂養(yǎng),飲水不限,飼料量為每只每天100-120g,適應性喂養(yǎng)1周后進入實驗。將其隨機分為4組,高脂模型對照組(control)、GSPE預防干預組(a)、通心絡預防干預組(b)、GSPE聯(lián)合通心絡預防干預組(ab),每組6只,分別飼喂與標準飼料均勻混合的含1%膽固醇、1%膽固醇+1%GSPE、1%膽固醇+通心絡(1g/kg.d)、1%膽固醇+1%GSPE+通心絡(1g/kg.d)的顆粒飼料。各組兔分別于實驗開始前1天及開始后的第4、8
7、、12周周末,在清晨空腹稱重后,經耳中動脈采血,留取血清標本。實驗的第12周末,各組兔經耳中動脈采血后,空氣栓塞處死,留取主動脈、心、腦、腎組織進行形態(tài)學觀察和免疫組織化學檢查。 (2)血清學研究:取上述4組兔的空腹血清標本,應用日立7170型全自動生化分析儀測定血清總膽固醇(totalcholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白膽固醇(lowdensitylipoproteincho
8、lesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(highdensitylipoproteincholesterol,HDL-C)含量;應用比色法測定血清MDA含量;應用硝酸還原酶法測定血清NO含量;應用酶聯(lián)免疫吸附(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)雙抗體夾心法測定血清VCAM-1、IL-6含量。 (3)病理學研究:對上述4組兔的主動脈、心、腦組織標本進行病理組織切片,應用光鏡和電鏡觀
9、察主動脈、心、腦組織標本病理改變并拍照。對主動脈進行CD68、α-actin、VCAM-1免疫組織化學染色,觀察主動脈血管內膜的病理改變并拍照。 (4)統(tǒng)計方法:各項測定值均以均數(shù)±標準差(x±s)表示,應用SPSS10.0統(tǒng)計分析系統(tǒng),多組間差異比較用ANOVA檢驗,兩組間差異比較用LSD檢驗,雙側p<0.05為有顯著差異。 結果 (1)與高脂模型對照組相比,GSPE對兔血脂無明顯影響(P>0.05),能顯著降
10、低血清MDA水平(8-12周末,P<0.05),顯著增加血清NO水平(4-12周末,P<0.001),顯著降低血清VCAM-1水平(4-12周末,P<0.001),顯著降低血清IL-6水平(4周末,P<0.05;8-12周末,P<0.001)。GSPE能減輕兔實驗性AS的病變程度,增加斑塊的穩(wěn)定性。 (2)與高脂模型對照組相比,通心絡對兔血脂影響不明顯(P>0.05),能顯著降低血清MDA(12周末,P<0.05),顯著增加血清
11、NO水平(4-12周末,P<0.001),顯著降低血清VCAM-1水平(4周末,P<0.05;8-12周末,P<0.001),顯著降低血清IL-6水平(8-12周末,P<0.001)。通心絡能減輕兔實驗性AS的病變程度,增加斑塊的穩(wěn)定性。 (3)與高脂模型對照組相比,GSPE聯(lián)合通心絡組對兔血脂影響不明顯(P>0.05),能顯著降低血清MDA(4周末,P<0.05;8-12周末,P<0.001),顯著增加血清NO水平(4-12周
12、末,P<0.001),顯著降低血清VCAM-1水平(4-12周末,P<0.001),顯著降低血清IL-6水平(4周末,P<0.01;8-12周末,P<0.001)。GSPE聯(lián)合通心絡能減輕兔實驗性AS的病變程度,增加斑塊的穩(wěn)定性。 (4)本實驗結果表明,GSPE與通心絡聯(lián)合應用對降低血清MDA水平可能存在協(xié)同作用,對增加血清NO水平有協(xié)同作用需進一步實驗驗證,對降低血清VCAM-1水平及降低血清IL-6水平證實存在協(xié)同作用。
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