青島地區(qū)宮頸病變組織中人乳頭廇病毒16型L1基因多態(tài)性分析.pdf

1、目的：HPV病毒基因存在變異,且具有種族和地域特異性。本研究通過對(duì)不同宮頸病變組織中HPV16L1基因的檢測(cè)和序列對(duì)比,分析了青島地區(qū)宮頸病變患者HPV16L1基因結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和變異規(guī)律,探討基因變異與宮頸癌的相關(guān)性,為高特異性疫苗的研制提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 材料與方法：(1)收集山東東青島地區(qū)宮頸癌新鮮組織61例,經(jīng)病理診斷為宮頸鱗狀上皮細(xì)胞癌;LCT(液基細(xì)胞學(xué)檢查)標(biāo)本300例,其中正常細(xì)胞47例,LSIL(低度鱗狀上皮內(nèi)病變

2、)100例,HSIL(高度鱗狀上皮內(nèi)病變)153例。300例LCT標(biāo)本中有明確病理診斷哲181例,其中慢性宮頸炎40例,宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervicalintraepitheliaineoplasia,CIN)Ⅰ～Ⅲ級(jí)141例。
　　 (2)用蛋白酶K法,分別提取新鮮組織和細(xì)胞DNA。
　　 (3)以提取的DNA為模扳,采用PCR技術(shù),以通用引物MY09/11篩選出感染HPV的標(biāo)本,然后用HPV16型特異性引物篩選出HP

3、V16陽(yáng)性標(biāo)本。
　　 (4)以HPV16陽(yáng)性標(biāo)本DNA為模板,擴(kuò)增L1基因全序列。
　　 (5)所獲PCR產(chǎn)物行基因全序列測(cè)序,應(yīng)用DNASTAR軟件,與德國(guó)HPV標(biāo)準(zhǔn)株進(jìn)行比對(duì)分析,尋找HPV16L1的突變位點(diǎn),分析核苷酸和氨基酸的變異,比較熱點(diǎn)突變位點(diǎn)突變頻率在各組的差異,并與其他國(guó)家其他地區(qū)突變化點(diǎn)進(jìn)行比較。
　　 結(jié)果：(1)慢性宮頸炎組,CIN組、宮頸癌組HPV感染率分別為75.0%(30140)、8

4、9.4%(126/141)和93.4%(57/61)。3組相比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=8.370,P=0.015)。正常細(xì)胞、LSIL、JISIL、宮頸癌細(xì)胞組HPV感染率分別為55.3%(26/47),61.0%01/100)、81.7%(125/153)和93.4%(57/61)。4組相比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=34.405,P=0.000)。
　　 (2)慢性宮頸炎組、CIN糾、宮頸組HPV16感染率分別為30.0

5、%(12/40)、41.1%(58/141)和65.6%(41)/61),3組相比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=14.874,P=0.001)。正常細(xì)胞、LSL、HSIL、宮頸癌細(xì)胞組HPV16感染率分別為10.6%(5/47)、32.0%(32/100)、53.6%(82/153)和65.6%(40/61)。4組相比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=44303,P=0000)。
　　 (3)所有經(jīng)過病理診斷的標(biāo)本中,共有96成功擴(kuò)增出

6、L1基因,其中慢性宮頸炎10例、CINI～Ⅲ53例、宮頸癌33例,其擴(kuò)增率分別為25.0%、37.6%和54.1%。所有LCT標(biāo)本中,共有136例成功擴(kuò)增出L1基因,其中HSIL70例,LSIL28例,正常細(xì)胞抹片5例。
　　 (4)L1基因共發(fā)現(xiàn)13處變異,所有標(biāo)本均發(fā)生C6240G、A6432G、6902insATC、6954delGAT及G7061A(無義)5處突變。另一突變熱點(diǎn)為A6178C,其在慢性宮頸炎、CIN、宮頸

7、癌3組間頻率分布沒有顯著性差異(X2=1.265,P=0.531),在正常細(xì)胞、LSIL、HSIL、宮頸癌細(xì)胞4組間頻率分布辦沒有顯著性差異(X2=6.705,P=0.082)。
　　 結(jié)論：(1)青島地區(qū)HPV16L1基因存在多態(tài)性,最常見的突變位點(diǎn)為C6240G、A6432G、6902insATC、6954delGAT、G7061A(無義)及A6178C。HPV16L1基因的多態(tài)性具有明顯的地域性特征。
　　 (2)