EB病毒編碼的病毒白介素-10基因多態(tài)性研究.pdf

1、目的：EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)開放讀碼框架BamHI-C片段(BCRF1)與人白介素-10(hIL-10)基因有高度同源性，其編碼的病毒IL-10(vIL-10)與hIL-10有相似的生物學(xué)活性，主要表現(xiàn)為免疫抑制活性。本研究旨在明確鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）、EBV相關(guān)胃癌(EBV-associated gastric carcinoma，EBVaGC)和健康人群

2、中vIL-10的變異規(guī)律，探討其變異意義。
　　 方法：對164例山東地區(qū)EBV陽性標(biāo)本，包括83例NPC和41例EBVaGC組織以及40例健康成年人咽漱液(Throat washing，TW)標(biāo)本提取DNA，采用PCR和DNA測序檢測vIL-10編碼基因BCRF1的序列，應(yīng)用DNAStar軟件對vIL-10基因核苷酸及氨基酸序列進(jìn)行對比分析。與EBV標(biāo)準(zhǔn)株序列比較，根據(jù)vIL-10成熟蛋白和信號肽區(qū)域出現(xiàn)的特征性改變對變異進(jìn)行

3、分類，比較NPC、EBVaGC和健康人群變異型的分布，分析序列變異對蛋白功能的影響。同時與以往發(fā)表同一人群EBV基因組BamHI F片段缺乏或出現(xiàn)BamHI識別位點(diǎn)的F/f分型（F和f型EBV）、早期基因BARF1變異（B95-8、V29A和Others變異型）進(jìn)行連鎖分析。
　　 結(jié)果：①應(yīng)用DNA Star MegAlign分析，NPC、EBVaGC和健康人群TW標(biāo)本中vIL-10基因序列相似性高達(dá)98.8％，126例(76

4、.8％，126/164)標(biāo)本與標(biāo)準(zhǔn)株B95-8氨基酸序列一致，被分類為B95-8變異型。②vIL-10成熟蛋白序列未發(fā)現(xiàn)共有氨基酸突變，出現(xiàn)6處無規(guī)律散在突變;vIL-10基因信號肽序列共發(fā)現(xiàn)2處共有錯義突變（V6M和G23S）和4處散在突變（R4S、L5F、C21R和D25N）。32例(19.5％，32/164)標(biāo)本在信號肽區(qū)域發(fā)生氨基酸突變，被分類SPM變異型，另外6例(3.7％，6/164)標(biāo)本在成熟蛋白序列各出現(xiàn)1處無規(guī)律散在突

5、變，分類為其它組(Others)。③vIL-10成熟蛋白序列受體結(jié)合區(qū)域及免疫抑制功能區(qū)域均高度保守，信號肽序列某些變異可能會影響信號序列的切割及蛋白質(zhì)分泌。④NPC、EBVaGC和健康人群均以B95-8變異型檢出率最高，但SPM變異型僅在25例NPC(30.1％，25/83))NPC組織標(biāo)本和7例(17.5％，7/40)健康人群TW標(biāo)本中檢出，EBVaGC組織中未發(fā)現(xiàn)該變異型，vIL-10變異型在NPC和健康人群的分布與EBVaGC明

6、顯不同（EBVaGC vs NPC:P＜0.0001;EBVaGC vs TW: P=0.006），NPC和健康人群之間的分布無顯著性差異(P=0.255)。⑤F/f分型、BARF1和vIL-10變異均成功檢測的145例標(biāo)本共發(fā)現(xiàn)10種不同的連鎖基因型（BamHI F/BARF1/vIL-10），以typeF/B95-8/B95-8最為多見，占67.6％(98/145)。10種連鎖基因型在EBVaGC和健康人群之間的分布無顯著性差異(P

7、=0.480)，但二者與NPC的分布不同，差異有顯著性(NPC vs EBVaGC:P＜0.0001; NPC vs健康人群:P=0.007)，type f/V29A/SPM、type F/V29A/B95-8和type F/B95-8/SPM在NPC具有相對較高的檢出率。F型和f型EBV毒株中BARF1/vIL-10基因型的分布不同(P＜0.0001)，f型EBV主要對應(yīng)V29A/SPM，占78.6％(11/14)，而F型EBV主要對

8、應(yīng)B95-8/B95-8，占74.8％(98/131)。
　　 結(jié)論：①vIL-10基因序列高度保守，尤其是其功能區(qū)。高度保守的序列利于其發(fā)揮免疫抑制功能，從而幫助EBV逃避和抵抗宿主免疫系統(tǒng)的抗病毒作用，長期在宿主體內(nèi)寄生。②B95-8變異型是山東地區(qū)vIL-10主要型別，SPM變異型可能與鼻咽部和口咽部上皮細(xì)胞相關(guān)。③BamHI F、BARF1和vIL-10基因變異存在關(guān)聯(lián)性，NPC中f型EBV主要對應(yīng)V29A/SPM基因型