乙型肝炎病毒C區(qū)及S區(qū)基因多態(tài)性的檢測(cè)分析.pdf

1、目的：探討乙型肝炎患者和健康攜帶者乙型肝炎病毒(hepatitis B vires，HBV)S基因和C基因的變異規(guī)律及其臨床意義，為深入分析病毒基因變異可能對(duì)病毒生物學(xué)行為以及機(jī)體對(duì)病毒反應(yīng)的影響提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)對(duì)臨床乙肝可疑病人及健康獻(xiàn)血員進(jìn)行檢測(cè)，篩選出乙肝病人和健康攜帶者；實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)HBV陽(yáng)性標(biāo)本DNA載量；PCR結(jié)合DNA測(cè)序?qū)BV C區(qū)和S區(qū)基因進(jìn)行多態(tài)性檢測(cè)

2、，并應(yīng)用DNAstar軟件進(jìn)行比對(duì)和分析。`
　　 結(jié)果：①與標(biāo)準(zhǔn)株相比，所有標(biāo)本C區(qū)基因序列均出現(xiàn)變異。在=2例標(biāo)本中出現(xiàn)的突變31處，包括PreC基因3處，C基因28處；其中9處為錯(cuò)義突變，1處為終止突變，其余21處均為同義突變。nt1827 c→a和nt2221 c→t出現(xiàn)在所有標(biāo)本，有6處同義突變出現(xiàn)于較多標(biāo)本中。4例乙肝病人標(biāo)本在nt1896位發(fā)生g→a突變，另有4例乙肝病人在HBcAgCTL識(shí)別表位84-101處發(fā)生

3、2處突變即S87G和197F或I97L。②有15例乙肝病人標(biāo)本S基因測(cè)序成功，與標(biāo)準(zhǔn)株相比均出現(xiàn)變異，3例標(biāo)本出現(xiàn)缺失突變，12例標(biāo)本出現(xiàn)單核苷酸突變45處，其中在=2例標(biāo)本中出現(xiàn)的突變9處。2處錯(cuò)義突變見(jiàn)于所有標(biāo)本，分別為氨基酸R122K突變(nt519 g→a、nt520 a→g)和A194V(nt735c→t)突變，另外5處錯(cuò)義突變分別見(jiàn)于不同的標(biāo)本。3例標(biāo)本在HBsAg"a"決定簇(AA124-147位)AA126發(fā)生I→T突變

4、，其余標(biāo)本未出現(xiàn)突變。③與標(biāo)準(zhǔn)株相比，16例乙肝病人和3例健康攜帶者標(biāo)本共出現(xiàn)67處堿基突變，其中在≥2例標(biāo)本中出現(xiàn)的突變20處，包括PreS1基因14處，PreS2基因6處。20處突變中，7處為錯(cuò)義突變，13處為同義突變。同義突變nt3036t→c、nt3039 t→g和nt3066 c→t以及錯(cuò)義突變L88V出現(xiàn)于所有標(biāo)本，均位于PreS1基因。還有1處錯(cuò)義突變、5處同義突變見(jiàn)于較多標(biāo)本。④DNA擴(kuò)增及測(cè)序的成功與否與HBV的DNA

5、拷貝數(shù)密切相關(guān)，本次研究DNA擴(kuò)增及測(cè)序成功的標(biāo)本其DNA拷貝數(shù)多大于40193/ml，DNA拷貝數(shù)較低的標(biāo)本不易獲得成功。
　　 結(jié)論：①HBV基因組極易發(fā)生突變，C區(qū)基因和s區(qū)基因有9個(gè)位點(diǎn)的突變見(jiàn)于所有擴(kuò)增成功標(biāo)本，為本此研究標(biāo)本所特有，提示這些突變熱點(diǎn)可能具有地域特異性，深入探討這些位點(diǎn)突變的意義，有助于闡明HBV致病的分子機(jī)制，并可對(duì)乙肝的基因診斷及預(yù)防提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。②C區(qū)基因和S區(qū)基因變異可引起HBsAg、HBe