江西地區(qū)免疫兒童感染的乙型肝炎病毒S基因突變分析.pdf

1、研究背景：
　　 自從1992年病毒性乙型肝炎疫苗在我國被納入兒童計劃免疫，低年齡組兒童人群HBV陽性檢出率逐年下降，但與此同時，由疫苗免疫壓力引發(fā)的HBV“a”抗原決定簇變異株的出現(xiàn)和流行，越來越受到了人們的廣泛關(guān)注，但是對江西地區(qū)免疫兒童感染的HBV“a”抗原決定簇變異情況的研究還未見報道。
　　 研究目的：
　　 本研究擬調(diào)查1996年后出生的乙肝疫苗免疫兒童HBV的感染，分析所感染的HBV S基因“a”抗

2、原決定簇的變異，尋找可能與免疫逃避相關(guān)的變異位點(diǎn)，并鑒定HBV基因型和血清型，為診療和預(yù)防兒童HBV感染提供重要參考。
　　 研究方法：
　　 1.臨床標(biāo)本篩選：收集在江西省兒童醫(yī)院就醫(yī)的全程乙肝疫苗免疫兒童血清標(biāo)本，ELISA方法檢測HBV-M，篩選出HBV感染的陽性標(biāo)本。
　　 2.HBV感染的統(tǒng)計學(xué)分析：采用x2檢驗(yàn)分析不同年齡、性別組間免疫兒童的HBsAg陽性率的差異。
　　 3.HBV S基因的

3、PCR擴(kuò)增與測序：采用高保真PCR方法對HBsAg陽性血清進(jìn)行HBV S區(qū)基因DNA擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物直接測序。
　　 4.“a”抗原決定簇變異位點(diǎn)分析：采用DNAman軟件對所測HBV S基因的核苷酸和氨基酸序列與參考序列進(jìn)行比對以分析血清型和“a”決定簇的變異。
　　 5.HBV基因型的鑒定：采用Editseq軟件、Clustalx(1.83)軟件和Mega4軟件繪制S基因遺傳進(jìn)化樹和使用在線Genotyping軟件與

4、參考序列比對以鑒定基因型。
　　 研究結(jié)果：
　　 1.標(biāo)本采集：研究者于2010年6月-2011年5月間在江西省兒童醫(yī)院采集就醫(yī)的乙肝疫苗全程免疫兒童(7.39±3.66歲)血清標(biāo)本13117份，男童7139人(54.42％)，女童5978人(45.58％)。
　　 2.HBsAg感染分析：從13117份血清標(biāo)本中共篩選出230份HBsAg陽性標(biāo)本，HBsAg陽性率為1.75％，男女兒童HBsAg陽性率分別為1

5、.78％和1.72％，兩者間的HBsAg陽性率差異不明顯(P>0.05)；每5歲設(shè)置的不同年齡段兒童HBsAg陽性率分別為1.80％、1.53％和2.00％，三者之間沒有明顯差異(P>0.05)；同一年齡段不同性別間免疫兒童HBsAg陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　 3.“a”抗原決定簇突變位點(diǎn)的檢測：從230份HBsAg陽性標(biāo)本成功擴(kuò)增并測序了118份HBV S區(qū)基因，從中檢測出24份標(biāo)本有“a”抗原決定簇變異，

6、變異率20.34％。在“a”決定簇中共發(fā)現(xiàn)了7個位點(diǎn)8種錯義突變，分別為1126T/S，P127T，Q129H，S132T，P142T，S143T和G145A。HBV“a”抗原決定簇兩莖環(huán)間的變異率和男女兒童感染的“a”抗原決定簇的變異率無顯著性差異(P>0.05)。
　　 4.血清型分析：氨基酸序列比對分析發(fā)現(xiàn)，118標(biāo)本中，105份為adw血清型，均為adw2亞型；7份為ayw血清型，均為ayw1亞型；6份為adr血清型，a

7、drq+4份，adrq-2份。
　　 5.基因型分析：進(jìn)化樹分析與在線Genotyping軟件檢測結(jié)果顯示，118標(biāo)本中，112份為HBV B基因型，占94.92％，都是B2亞型；6份為HBV C基因型，占5.08％，其中4份為C2亞型，2份為C3亞型。基因型分布在不同性別間無明顯差異(P>0.05)，基因型和血清型之間未反映出異質(zhì)性，存在一定的關(guān)聯(lián)。
　　 研究結(jié)論：
　　 1.從1992年起將乙肝疫苗納入兒童

8、計劃免疫管理后，江西地區(qū)兒童HBsAg陽性率有了明顯的下降，低于乙肝疫苗納入計劃免疫前的兒童HBsAg陽性率。
　　 2.在江西地區(qū)乙肝疫苗免疫兒童人群檢測出“a”抗原決定簇變異的HBV感染，但并未發(fā)現(xiàn)有明顯優(yōu)勢的變異株類型，提示S基因中“a”決定簇的某些位點(diǎn)變異可能是逃避乙肝疫苗免疫導(dǎo)致HBV感染的機(jī)制之一。
　　 3.江西地區(qū)乙肝疫苗免疫兒童感染的HBV以adw血清型為主，并有ayw血清型和adr血清型存在。