益腎健骨合劑在自體骨修復骨缺損中的干預效應及IGF-1表達的研究.pdf

1、目的：探討中藥復方“益腎健骨合劑”在自體骨修復骨缺損中的干預效應及與IGF-1（insulin-like growth factor-1，IGF-1）生長因子的表達關(guān)系。
　　方法：新西蘭大耳白兔90只，雌雄不限，體重（2.0±0.5）kg。隨機分為實驗組、有效對照組和對照組各30只。分別于術(shù)后1、2、4、6、8周每組隨機處死6只新西蘭大耳白兔,取其橈骨原骨缺損植骨處生長組織檢測。實驗組、有效對照組與對照組均在氯胺酮30mg/kg

2、肌注麻醉后，按無菌操作技術(shù)行左側(cè)橈骨中上段截骨，造成15mm骨和骨膜缺損，兩端髓腔用骨臘封閉，另取雙側(cè)自體髂骨制成2×2×2mm的粒狀骨，于骨缺損處植入上述粒狀骨。創(chuàng)口嚴密縫合，不做內(nèi)、外固定，分籠喂養(yǎng)。術(shù)后實驗組用含中藥復方“益腎健骨合劑”的混合飼料喂養(yǎng)?！耙婺I健骨合劑”由鹿茸、淫羊藿、杜仲、水蛭、骨碎補、續(xù)斷、自然銅、土鱉蟲組成，是根據(jù)《中國藥典》“跌打活血散”及東北長白山地區(qū)民間促骨愈合秘方組合加減配制而成。有效對照組用含傷科接骨

3、片的飼料喂養(yǎng)。對照組用不含中藥的普通飼料喂養(yǎng)。自由活動，術(shù)后肌肉注射慶大霉素3天，預防感染。術(shù)后分別在1、2、4、6、8周時行兔橈骨X-線檢查，并取兔橈骨骨缺損處組織作為標本，進行HE染色、電鏡、免疫組織化學、原位雜交、RT-PCR檢測，具體觀察和分析“益腎健骨合劑”在自體骨修復骨缺損中的干預效應及胰島素樣生長因子-1（IGF-1）的表達關(guān)系。
　　結(jié)果：
　?。?）X線片檢查：1周時實驗組、有效對照組和對照組修復區(qū)均無明顯

4、差異變化，可以看到骨缺損處移植的小顆粒狀骨影，界限清晰，無新生骨痂形成；2周時實驗組及有效對照組開始有少量骨痂形成，骨缺損界限仍清晰，對照組骨吸收明顯；4周時實驗組及有效對照組均有片狀骨痂形成，骨痂形成量較前明顯增多。相對于實驗組比較，有效對照組片狀骨痂較少。而對照組有部分骨痂形成，缺損區(qū)骨質(zhì)稀疏；6周時實驗組骨缺損處骨痂生長連續(xù)，缺損區(qū)示模糊不清，可見大量增生的編織骨。有效對照組出現(xiàn)少量編織骨，但部分區(qū)域有骨吸收表現(xiàn)。而對照組骨缺損處

5、雖有輕微模糊改變，但部分骨質(zhì)出現(xiàn)硬化改變；8周時可見實驗組及有效對照組骨缺損處形成大量骨痂，成彌漫性密度增高影，而且實驗組骨缺損有部分骨髓腔形成。但對照組第8周時仍未有骨髓腔的再通跡象。對照組骨缺損修復區(qū)雖然同樣形成骨痂，但是相比實驗組、有效對照組而言，骨痂形成量少且生長不均勻。
　?。?）HE染色：實驗組及有效對照組與對照組在第1周時移植骨內(nèi)有部分骨細胞壞死、細胞核濃縮、甚至消失，移植骨內(nèi)有成纖維細胞增生并伴有炎性細胞生成；2-

6、4周時移植骨內(nèi)有少量軟骨細胞形成。同時實驗組伴有大量血管生長，移植骨內(nèi)細胞明顯吸收并有核濃縮碎裂現(xiàn)象。有效對照組伴有較多血管生長，移植骨內(nèi)有細胞吸收并也出現(xiàn)核濃縮碎裂現(xiàn)象；6-8周時移植骨區(qū)的血管數(shù)量增多，實驗組有明顯網(wǎng)狀新骨生成，并伴有骨髓腔的形成，有效對照組可見網(wǎng)狀新骨生成，并伴有少量骨髓腔的形成。對照組1周時移植區(qū)也有大量的炎性反應與實驗組無明顯變化；但是在2-4周后且伴有少量軟骨細胞和血管形成；6-8周時骨痂量增多并伴有血管的增

7、多，但尚未形成骨髓腔。
　?。?）電鏡觀察：1周時，實驗組、有效對照組和對照組均有部分骨小梁壞死狀物，并伴有較多炎性細胞的產(chǎn)生；2周時，實驗組可見細胞呈梭形，骨細胞核濃縮，染色質(zhì)凝聚靠邊，有效對照組亦可見梭形細胞；對照組未見梭形細胞生成，骨細胞周圍可見膠原纖維，核基質(zhì)致密靠邊；4周時，實驗組毛細血管數(shù)量增多，骨陷窩及骨小梁形成，有效對照組毛細血管數(shù)量也增多，但是骨細胞、骨陷窩及骨小梁形成相對較少。而對照組毛細血管數(shù)量相對較少并伴周

8、圍有骨基質(zhì)形成；6-8周時，實驗組可見成骨細胞形成，胞質(zhì)內(nèi)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)數(shù)量明顯增多。有效對照組可見骨原細胞相對活躍。而對照組骨原細胞數(shù)量少，骨基質(zhì)大量形成，無明顯骨小梁形成。
　?。?）免疫組織化學：1周時對照組、有效對照組和實驗組IGF-1染色見骨細胞胞漿呈彌漫性淡染，但各組無明顯區(qū)別，均呈弱陽性表達；2周時實驗組骨原細胞染色加深，IGF-1染色呈陽性表達，有效對照組骨原細胞也可見部分加深，呈弱陽性表達，而對照組仍呈現(xiàn)彌漫性的淡染

9、表達；4周時實驗組IGF-1染色呈強陽性表達，伴隨骨髓腔的形成，成骨細胞著色較深，軟骨細胞也可見濃染。有效對照組IGF-1染色呈陽性表達，伴隨骨髓腔的形成，骨細胞著色。而對照組也染色加深但濃度略淡于有效對照組、實驗組，呈弱陽性表達；6-8周時各組骨組織細胞的IGF-1染色較前均呈相應程度的減弱表達，對照組呈弱陽性表達，有效對照組呈陽性表達，實驗組仍呈強陽性表達。
　?。?）原位雜交：1周時對照組、有效對照組均與實驗組無明顯差異，I

10、GF-1探針染色均呈弱陽性表達；2周時實驗組IGF-1探針染色呈陽性表達。有效對照組IGF-1探針染色基質(zhì)著色呈弱陽性表達，可見部分骨組織細胞著色，而對照組IGF-1探針染色著色較有效對照組略少呈弱陽性表達；4周時實驗組IGF-1探針染色基質(zhì)著色呈強陽性表達，有效對照組 IGF-1探針染色見骨細胞著色呈陽性表達，而對照組IGF-1探針染色著色呈弱陽性表達；6-8周時各組均可見骨小梁形成，骨組織細胞數(shù)也較前增多，但骨組織細胞探針染色著色表

11、達均較前開始減弱。有效對照組 IGF-1探針染色呈弱陽性表達，而對照組IGF-1探針染色著色較有效對照組表達減弱。實驗組IGF-1探針染色呈陽性表達。
　　（6）RT-PCR結(jié)果：IGF-1基因mRNA的相對表達量在第1-4周呈上升趨勢，第6-8周呈下降趨勢。實驗組與有效對照組IGF-1基因mRNA的相對表達量均比對照組高，其中實驗組IGF-1在第2-8周的相對表達量與對照組比較有顯著性差異（P＜0.01），第1周最低，表達量為1

12、.302±0.058；在第4周達到最高，表達量為3.914±0.273；有效對照組IGF-1在第2-8周的相對表達量與對照組比較有顯著性差異（P＜0.01），第1周最低，表達量為1.278±0.074；在第4周達到最高，表達量為3.286±0.181。有效對照組IGF-1在1-8周的相對表達量均要低于實驗組，其中在第4周的表達量兩者比較有統(tǒng)計學差異（P＜0.01）。
　　結(jié)論：中西醫(yī)結(jié)合治療骨缺損療效滿意。中藥復方“益腎健骨合劑”